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标题:[求助]细胞污染，细菌贴壁生长？

vcve[使用道具]
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发表于 2012-6-2 18:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]细胞污染，细菌贴壁生长？


千万小心之下，养得珍贵细胞终于可以传代了。没想到刚滤的胰酶污染了，害得我的细胞再一次全军覆没了。培养液混了，我还是没有放弃，去上清，PBS冲洗3次，加培养液，大剂量的泰能。次日，培养液没混，但显微镜下好多菌体形状 ，也不动，PBS洗不掉，是不是这种细菌也贴壁生长阿，那时不是根本除不掉了呀。郁闷，请有经验战友给与指点迷津。谢谢啦。
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vcve[使用道具]
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发表于 2012-6-2 18:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

今天求助科里的老技术员，她说贴壁的不像细菌。说细菌不贴壁生长，那我那个像细菌体的能不能使死的细菌啊。大家见过贴壁生长的细菌么？我的细胞非常珍贵，我很紧张，能不能救过来呀，有经验的战友给点意见吧。
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langlang[使用道具]
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发表于 2012-6-2 18:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
嗯，不要太紧张，贴壁的东西有可能是些细胞碎屑或者是蛋白沉积，你在高倍镜下看看贴壁的东西有没有运动，如果静止不动，很有可能就不是微生物，我也没有见过贴壁生长的细菌，不过你挽救细胞的那种精神倒是让我很感动，我一般见到培养基混浊就立刻抛弃了，呵呵，祝你实验顺利
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chuntian1983[使用道具]
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 小中大

我也遇到过类似的情况，一开始我也以为是染菌了，但是培养液并不混浊，只是从显微镜下观察的时候有很多小点，可能是细胞碎屑。如果真的是细菌污染的话，一般来讲培养液的营养这么丰富，细菌肯定早就疯长了，理论上来讲，细胞培养液会很混浊的。
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vcve[使用道具]
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 小中大

手头没有相机，不能传图片，不好意思。我接着又用泰能治了几天，细胞生长非常好，已经再次传代了。现在高倍镜下偶尔可以见到活的细菌，背景也清楚了许多，想来可能是大剂量消炎药杀死的菌体贴在壁上了？没敢停消炎药。非常有希望继续，不知能不能彻底铲除细菌。谢谢大家！
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vcve[使用道具]
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发表于 2012-6-2 18:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

反馈一下实验结果。我这十几天一直持续每天冲洗、换液，用泰能抗菌，但是细菌还是没有除掉，高倍镜下还是能看到少量会动的微生物。一旦传代，或48小时不换液或不加抗菌药，细菌就会多起来。除菌难啊。真想扔了算了！所以，要是有种子的话，千万不要挽救污染的细胞。
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vcve[使用道具]
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发表于 2012-6-2 18:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
再反馈一下试验结果，我的污染的细胞持续用药中，还是有潜在污染，背景不干净。我觉得抢救失败。而且我觉得贴壁的就是细菌，虽然不动，但还是会繁殖，等哪天我搞张照片传上来。用药的结果就是细胞性状有很大改变，不能用于试验了。我又搞了株细胞，辛勤浇灌中。
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vcve[使用道具]
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 小中大

我把所有污染的细胞全扔了，真过瘾。只是我好像一朝被蛇咬，十年怕井绳了。现在的细胞背景上有小点状东东，我就非常担心，尤其还能看见这些小点在动。但据说细胞代谢产物有的也表现为点状，而且也会有些摆动。我的细胞状态还好，培养基也没有混掉，当然细菌较少时是不会混的。虽然尽可能的无菌操作，还是很担心。唉，做下病了！
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发表于 2012-6-2 18:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

养细胞会让你越来越胆小，
还真的让你体会到心痛的感觉的！
但是不管怎么样，必须挺住！
因为我们要毕业啊！
冷暖自知把！
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yes4[使用道具]
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发表于 2012-6-2 18:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

个人认为培养基浑浊不一定是污染了，特别是冻存的培养基解冻后会有些浑浊的（MEM）。应该是析出的东西吧。
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