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标题:[求助]勤换液会使细胞变老吗？

leifengta[使用道具]
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发表于 2012-6-6 11:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]勤换液会使细胞变老吗？



各位大虾，我养的肿瘤细胞长得很慢，现在有的细胞像是老化了，我复苏后几乎天天换液，一直长得没有师姐们说得那么快，所以还没等到细胞铺满50-60%就老了，是因为我换液换得太勤了吗？还是细胞污染了？
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yes4[使用道具]
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发表于 2012-6-6 11:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
勤换液应该不会直接导致细胞变老，前提是你的培养液各各组分均属正常。看你的情况貌似是你细胞解冻以后（或冻时）状态就不好，建议解冻一管培养。肿瘤细胞很好养的应该。
当然细胞污染应该检测排除一下。
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shenkunjie[使用道具]
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发表于 2012-6-6 11:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

肿瘤细胞应该长得很快的，用不着天天换液，可能是复苏以后状态就不好或者有污染，可以和别人要一瓶或者重新复苏，冻存时细胞密度不能太大了，否则解冻后细胞也容易死掉。
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leifengta[使用道具]
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发表于 2012-6-6 11:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

哦，请问细胞污染应该怎么检验啊？
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nn255[使用道具]
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发表于 2012-6-6 11:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
在许多情况下，勤换液并不有利于细胞的正常生长。因为细胞生长除了需要培养基提供营养外，有时需要其自身分泌的一些因子的存在才能促进正常生长的，而且这些因子需要达到一定浓度才行。而你勤换液则可能破坏了这个平衡。另外，有些细胞生长也需要达到一定的细胞密度才行，少了也不长，这也是一个原因。
至于检测污染，肉眼看培养基是否混浊，镜下观察是否有丝状、杆状、颗粒状的东东，而支原体污染的检测要困难些，只能凭经验喽。
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leifengta[使用道具]
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发表于 2012-6-6 11:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
哦，谢谢！镜下我看见了一根杆状的东东，是绿色的，不知是不是污染了？可不可以再养养观察看看，如果那东东数量增多，就提示是真菌污染啊？
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qqq111[使用道具]
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发表于 2012-6-6 11:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
不知道你养的是什么细胞！因为我养的是HL-60细胞，这个细胞比较敏感，换液早了也不行换液晚了细胞就死了，而且我们现在要看培养基颜色很黄了才能换液！因为换早了细胞的状态不好1、虽然不会死但是做的结果不好！所以一般我们复苏细胞以后只加四吸管培养基！然后就不动他了！等它培养基颜色很黄了，镜下看一颗一颗的而且透亮的很圆，说明细胞状态很好。可以换液了。细胞状态不好还跟冻存有关系！在冻细胞之前细胞状态不好的话！复苏的细胞多半也不行！只有慢慢调，我最长一次复苏细胞过了一个多星期细胞才长好,不要着急。在观察看看。
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leifengta[使用道具]
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发表于 2012-6-6 11:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢！现在我的细胞换液过了三天，去看发现，细胞数量变少了，原来挤在一块的几个活力还不错的细胞现在都不见了，细胞核色深的细胞以及变圆变梭状的（贴壁好是呈多角形的）增多了，但漂浮的仍然不多，我现在是不是应该换液（因为老化细胞，死细胞产生对细胞生长有害的物质）还是再等等（因为漂浮的也不多）？请点拨点拨晚辈我呀！谢谢！
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dog002[使用道具]
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发表于 2012-6-6 11:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

原因一，极有可能细胞污染，如果是污染的话，别费事干脆不要了，复苏一个冻存细胞重新培养。因为污染很难根除，你会很费时费力费头发。
原因二，注意血清的质量。参考文献，看一看文献中同种细胞是如何培养的？使用何种培养基？是否另加其它成分？
可能不全面，先提两条供参考。
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loli[使用道具]
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发表于 2012-6-6 11:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

会不会是培养基的问题，我们实验室有个同学也是养肿瘤细胞，用DMEM培养，结果细胞状态极差，换成RP1640后，细胞就长得很快了。
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