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标题:[求助]流式测细胞周期结果测得很多凋亡细胞怎么办

hyuu[使用道具]
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发表于 2012-6-6 11:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]流式测细胞周期结果测得很多凋亡细胞怎么办



我昨天用流式测细胞周期，是要看我的药物是否能把细胞抑制在G2/M期，结果流式图检测到很多凋亡细胞，那个流式老师说我的细胞无法区分出来S 和G2/M期，请问有这种可能吗，有没有什么更好的软件或方法可以区分出来呢
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eric930[使用道具]
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发表于 2012-6-6 11:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

是否用未处理的细胞做对照,也做了周期分析?家能否将图发过来看看?
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hyuu[使用道具]
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发表于 2012-6-6 11:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

不好意思，我还以为没有人回复呢，我做了两种细胞，均出现了问题，EC9706细胞是加药组凋亡太多。
HCT-116是G2和M期分不开，不知道是某个软件分不开，换个软件就可以了，还是我做的这个结果就没办法分开了，需要重做？
如果重做需要在细胞培养和加药方面做什么改变呢
这是我做的流式图，两种细胞，每个细胞药物作了两个时间
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发表于 2012-6-6 11:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

明显的非特异性DNA损伤，周期特征完全破坏。
重做同时药物减量。
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hyuu[使用道具]
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发表于 2012-6-6 11:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

哦，我们这里流式是用别人的机器，老师说让我换小点浓度，做几个时间梯度，在镜下观察，觉得哪个时间的可以再拿去做流式，我现在不知道观察到哪种程度会可以，是不是一般能测出细胞周期的时候，镜下观察细胞还是状态没有什么大的改变的。
因为我这次测之前都已经看到细胞开始出现不正常了。结果一测全都是凋亡
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duoduo[使用道具]
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发表于 2012-6-6 12:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

原因：药物浓度太大
建议：
1、在用流式分析细胞周期之前，应该先用不同浓度药物处理细胞并定时观察细胞的状态，通过观察找到能够抑制细胞增值的最佳浓度，如果某个浓度有大量细胞漂浮死亡说明细胞浓度太大。
2、楼主应该先用MTT或CCK－8检测，通过IC50也可以确定药物的最佳检测浓度。

另外用PI染色测细胞周期是无法分开G2和M期的。
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hyuu[使用道具]
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发表于 2012-6-6 12:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
楼主不是要区分出G2和M。
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hyuu[使用道具]
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发表于 2012-6-6 12:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我用的浓度就是通过MTT测出来的IC50值，但是做流式试验时是在25ml培养瓶中养细胞，加药的绝对量有变化，结果加药后很短时间就看细胞不对了。看来我应该缩小细胞浓度，观察不同时间细胞的状态，不同时间收集，直到看到凋亡的时候，然后把这几个时间中间那个时间拿去做流式，应该算比较合理的办法吧，没办法，流式不是自己的，测一次还好多钱，只有自己这样估算
另外大家帮我分析一下我那个HCT-116的结果是怎么回事，怎么阴性对照也分不开G2和S期啊，是不是软件的问题，还是我细胞本身的问题
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hyuu[使用道具]
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 小中大

各位有没有谁养过HCT-116的，一般分瓶后多长时间开始增殖呢
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HPLC使者[使用道具]
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发表于 2012-6-6 12:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
胞本身的问题。降药物浓度或缩短作用时间后再观察可能会好些。
不过我有一个预感，你们的这个药可能是损伤性为主，也许就不适合以周期改变为主要观察角度。
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