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标题:[求助]死细胞，很急

66小飞侠[使用道具]
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发表于 2012-6-6 16:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]死细胞，很急



大家好！我是养的肝癌H22细胞，由于暑假实验室液氮出现没有的现象，所以对我的细胞破坏很大。现在我复苏的细胞里有很多死细胞。但肝癌H22是悬浮细胞，很难把活细胞与死细胞分开。我曾经通过500rpm/min，5min离心去除死细胞，但效果不佳。请各位高手给予指点如何将这些死细胞分离出来，非常感谢！
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zranqi_1[使用道具]
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发表于 2012-6-6 16:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

对悬浮细胞而言，去除死细胞，我有一个较好的方法：待活细胞达一定数量后，取少量进行传代，多传几次活细胞就可覆盖死细胞了，离心是分不开的。
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66小飞侠[使用道具]
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发表于 2012-6-6 16:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
但是我现在死细胞很多，比活细胞比例还高很多，再多次传代更难存活了，所以挺头痛的！
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发表于 2012-6-6 16:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
建议复壮后再使用，除离心外，也可采取低密度传代培养，即传代时降低细胞密度，按照这个密度经过几次传代后，细胞有可能复壮！另外，还可适当提高FBS含量，有助于细胞生长！

祝实验顺利！
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发表于 2012-6-6 17:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
恩，谢谢大家的指点。昨天我又重新复苏了细胞，这次活细胞大概占50％，刚复苏的细胞状态也不好，这几天我又怎么处理它能让它活下来，并且状态调整好呢！这次复苏的细胞都是好不容易找来的，对我很重要，不能让它再死了，急切希望大家传教点经验！
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发表于 2012-6-6 17:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

不建议用低密度养，会长的很慢，细胞需要达到一定的密度才会正常增殖
可以考虑用小皿培养，加大细胞密度，加大血清含量，一天传一次代，估计一个星期就差不多了
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发表于 2012-6-6 17:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢楼上的指点。但是我现在细胞密度已经高了，只是里面不少死细胞，但由于都是悬浮细胞，现在也不能去除。第二天看到死细胞比例又增加了，好担心！你说一天传一次代，刚复苏的细胞能这样频繁地传代吗？谢谢！
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发表于 2012-6-6 17:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

而且这样每天传代，细胞密度会降低吧！现在细胞状态不好，几乎不会长什么呢！？
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tianmei001[使用道具]
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发表于 2012-6-6 17:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
当然，细胞是群体生长的，密度越大约有利于其生长，但现在问题是想恢复细胞状态，而死细胞过多的存在，肯定会干扰正常细胞的生长，所以我觉得LZ当务之急还是要除去死细胞！

悬浮细胞不像贴壁细胞，可以通过贴不贴壁分离死细胞，所以我还是建议采取高FBS，低密度传代培养；待几次传代后，死细胞量减少后，再提高细胞传代密度；

当然，为了保险起见，同时可继续正常密度或高密度培养，多种培养方法可同时进行，看哪种复壮效果好，因为不同细胞不同条件影响因素太多了，不好说哪种效果会好；

祝好运！
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66小飞侠[使用道具]
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发表于 2012-6-6 17:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢楼上的全面回答！还有个问题我现在细胞状态不好，死细胞也有些破裂使培养基好多杂质，每次换液或传代通过离心可以去掉一些杂质，但是现在细胞状态不好，总离心也会影响细胞存活吧？还有什么好方法呢？谢谢！
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