[求助]细胞老化的几个问题

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标题:[求助]细胞老化的几个问题

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发表于 2012-6-8 13:24 资料个人空间短消息加为好友

小中大

怎么在显微镜下观察细胞的生长情况?培养液的颜色,清亮程度,细胞的分布,细胞的形态,核的有无,胞浆的情况都可以在一定程度上说明细胞的生长状态.
细胞浆内出现黑色颗粒的话提示细胞老化,如果不加以处理的话,颗粒会由细变粗,出现空泡,核逐渐消失,细胞界限也会逐渐模糊,最后就可以见到漂浮的黑色丝网状细胞尸体.
问题是:1,如何防止及处理细胞老化的问题?2,经处理后这些老化的细胞可以恢复吗?3,有时,培养后细胞形态发生了巨大的变化,出现怪异的外形,这也是老化的迹象么?这种细胞形态会随着细胞数的增加而改善吗?

社会主义好[使用道具]
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发表于 2012-6-8 13:24 资料个人空间短消息加为好友

小中大

还有个问题:缺乏谷氨酰胺和缺乏血清的细胞在形态上可以区分吗?

rxcc33[使用道具]
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发表于 2012-6-8 13:24 资料个人空间短消息加为好友

小中大

如果你养的是细胞株的话，那么30代以上最好弃掉，重新复苏新的细胞。老化的细胞形态不会随着细胞数的增加而改变，而且细胞增殖变慢，就像你说的最后就可以见到漂浮的黑色丝网状细胞尸体。这样的细胞即使你勤换液状态好一点，用于实验中仍然没有任何改善。

wmp1234[使用道具]
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发表于 2012-6-8 13:25 资料个人空间短消息加为好友

小中大

老化的细胞一般不会恢复。在开始养细胞传代时，就要特别注意冻存细胞，以保持细胞有种子存在，可以有效的防止细胞老化。细胞形态怪异未必是老化的特征。可能为以下情况1：培养细胞中是否有其它杂细胞存在；2：细胞培养的条件是否严格按照要求进行，有时改变细胞培养环境或条件后，细胞会出现形态变化甚至变异等。细胞老化往往表现为培养条件不变的情况下：细胞增殖变缓，生长变慢，细胞数增加缓慢，死细胞增多，超过了正常的增长周期等。

wmp1234[使用道具]
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发表于 2012-6-8 13:25 资料个人空间短消息加为好友

小中大

缺乏谷氨酰胺和缺乏血清的细胞在形态上一般难以区分。只是较长时间缺乏血清的细胞形态变小，变圆，分裂相少见而已。

lixi559[使用道具]
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发表于 2012-6-8 13:26 资料个人空间短消息加为好友

小中大

防止老化的措施是：勤传代，勤换液，勤观察。
如果发现细胞老化，可以把细胞消化下来（贴壁细胞），用hanks液洗涤800rpm 3min离心一次，后用hanks液重悬，1000rpm 5min 离心，后在传到细胞瓶中。这个方法有一次我自己用过，这样处理后细胞重新长好了。
如果这样不幸的的话，只能重新复苏了。

lixi559[使用道具]
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发表于 2012-6-8 13:26 资料个人空间短消息加为好友

小中大

以我的看法是老化的细胞形态不怎么透明，胞膜不光活，另外瓶内细胞悬浮较多，贴壁不老，细胞团感觉如灰质感。

junhun[使用道具]
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发表于 2012-6-8 13:26 资料个人空间短消息加为好友

小中大

如果老化的是贴壁的细胞，那么可以看他的贴壁形态，贴壁不牢，细胞膜界限可以在显微镜下面看的很清楚了。而且老化的细胞不清凉透明，胞核也看不清，反正看上去就没有活力。
防治老化最好的方法可能就是传代的时候密度要适中，有些细胞不能太密也不能太稀，每种细胞差异很大。如何挽回老化的细胞就没有试过了。培养后出现怪异的外形这个就更复杂了，有可能是不适应培养液，也有可能是压力，密度，PH值不对，或者污染（真菌，细菌，支原体等），总之就是细胞觉得不舒服，有可能就会在细胞形态上表现出来。
一般老化的细胞最好就丢弃别用了。

baidukk[使用道具]
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发表于 2012-6-8 13:27 资料个人空间短消息加为好友

小中大

老化的细胞一般，表面分泌物会增多，生长缓慢，如果是贴壁细胞，细胞表面会比较脏，常规HE染色会发现细胞表面很多附着的脏物，细胞形态发生与新细胞不同的变化，如上皮细胞等会出现很多梭型长胞质突起等形状细胞。
出现怪异的形状不一定就是老化，有可能与培养条件如pH，血清溶度，生物污染等有关。防止老化的方法最主要还是要做到勤观察、勤换液、勤传代、勤保种，特别是传代，不能等细胞太密了之后传，一般细胞长到70－80％传代最好。老化后的细胞很难再重新年轻化，呵呵，重新复苏吧。

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发表于 2012-6-8 13:27 资料个人空间短消息加为好友

小中大

增加换液次数，使用质量较好的血清，细胞对血清特别敏感，若血清的质量不是很好，直接影响细胞的生长，传代时候若要得到比较好的下一代细胞，最好是等其未长满，在70%-80%时候传代，若一旦发现老化的细胞，则要注意用旧的培养液离心一次为好，去除破损的和老化变形的细胞。传代时候要注意稀释比例，太多或太少都不好。

有时,培养后细胞形态发生了巨大的变化,出现怪异的外形

可能是因为ph,渗透压的改变，也有可能是变异，看看这种细胞的数量，若很多，才能说明是老化，也不排除感染真菌的可能，感染真菌在初期并不会使培养液改变性状的

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