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标题:[讨论帖]神经干细胞、神经元培养互助小组

biabiade[使用道具]
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发表于 2012-6-8 16:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[讨论帖]神经干细胞、神经元培养互助小组


本人是做神经干细胞培养的，求助一些关于神经干细胞、神经元原代培养的有关问题，很零散不便于交流，于是想创建一片园地，专供做相似研究的群友们交流经验，共同进步，顺利完成试验
希望斑竹和各位群友支持。谢谢！！
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october7[使用道具]
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发表于 2012-6-8 16:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我在做海马神经元凋亡,想请教你们怎么把海马组织制成单细胞的?
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pengke1983[使用道具]
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发表于 2012-6-8 16:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我在做海马神经元凋亡,想请教你们怎么把海马组织制成单细胞的?

我是做纹状体NSCS培养的，也需要制备单细胞悬液，我想虽然我们的目标细胞不同但制备细胞悬液的目的是相同的，所以将我的方法介绍如下，望批评指正、相互交流。
1、取材后将组织块置于小烧杯或离心管中，加入培养基用普通火焰剖光的滴管吹打20次左右，此时培养基会因有大量细胞悬浮而变得浑浊。
2、静置细胞悬液1分钟，使未吹散的组织块沉入容器底部，小心吸取上部细胞悬液，尽量不要吸出组织块。
3、再用自己特殊剖光的滴管吹打10次左右，注意剖光后管口直径大约1~2mm，这样可以使细胞最大限度地形成悬液，又不至于过度损伤细胞。
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发表于 2012-6-8 16:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我是这样做的,取出海马组织,用0.25%胰酶37度消化20分钟,然后用吸管吹打,
100目的筛板过滤,取滤液1000转离心5分钟,去上清液加PBS吹打成悬液,但每次都不成功,不是细胞成团就是细胞碎了,请问是什么原因
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发表于 2012-6-8 16:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我也要做神经元的培养，请教一个问题，神经干细胞无血清培养基的组成成分？是不是可以让神经干细胞选择性的生长（据有关资料说的）？
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发表于 2012-6-8 16:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我是这样做的,取出海马组织,用0.25%胰酶37度消化20分钟,然后用吸管吹打,
100目的筛板过滤,取滤液1000转离心5分钟,去上清液加PBS吹打成悬液,但每次都不成功,不是细胞成团就是细胞碎了,请问是什么原因

我个人认为您的操作中有两处需要注意：
1、消化后吹打得次数，最好不要超过20次，消化本身就对细胞有较大的损伤，在过度吹打，自然会有大量细胞死亡。
2、离心的转速太高，我用400转离心，5分钟，可以最大限度地除去碎片
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KGZ564[使用道具]
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发表于 2012-6-8 16:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我也要做神经元的培养，请教一个问题，神经干细胞无血清培养基的组成成分？是不是可以让神经干细胞选择性的生长（据有关资料说的）？

我用的完全无血清培养基的成分：DMEM/F12（1：1），2% B27 supplement，1% N2 supplement，青霉素、链霉素各100U/ml，EGF 20 ng/mL，b-FGF 10ng/mL。在无血清培养条件下只有神经干细胞能够长期存活，增殖，而神经元和胶质细胞则不能长期存活。
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发表于 2012-6-8 16:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 KGZ564 于 2012-6-8 16:39 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
我也要做神经元的培养，请教一个问题，神经干细胞无血清培养基的组成成分？是不是可以让神经干细胞选择性的生长（据有关资料说的）？

我用的完全无血清培养基的成分：DMEM/F12（1：1），2% B27 supplement，1% N2 supplement，青霉素、链霉素 ...

知道了，谢谢。另外可不可以说一下你的B27 supplement，N2 supplement的具体组成，含量？N2 supplement中的亚硒酸钠因为要开证明好难买，不知道你是怎么买的？还有这样培养的神经干细胞在这种情况下会分化吗？
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greenbee[使用道具]
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发表于 2012-6-8 16:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

B27 supplement，N2 supplement GIBCO公司都有，价钱也不贵，为什么要自己配呢，虽然他们的配方地公开的，但也不容易准确掌握
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发表于 2012-6-8 16:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
大家好，看到这么多人都作这方面，心里真高兴。
我是一刚刚开始做 “神经元“ 培养的新手。以后会有许多不懂的地方，请大家多指教哦。
今天我主要有3个问题想问问：
1、为了省钱，培养基是不是一般都买干粉阿？做一套试验大约需要多少？如果没有时间限制，我可不可以一次大量买够，然后-20度冻存阿？
2、本来打算用10%胎牛血清，可试验老师告诉我说最好用10%胎牛，加10%马血清。是这样吗？不用马血清养的效果是不是不好啊？那去哪里买马血清？
3、如果第一次养，是不是选胎鼠比较容易些？我怕用新生24小时内乳鼠养不活呢。：（
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