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标题:[求助]细胞筛选中碰到的问题

我佛慈悲[使用道具]
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发表于 2012-6-9 12:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]细胞筛选中碰到的问题



质粒转染到**细胞，经核酸和蛋白的鉴定已经转进去了，后用zeocin筛选，药物浓度已经从500ug/ml增加到1500ug/ml了，但每次细胞都不能全部死光，到第15天都还有10～20%细胞存活，无论是空载体组还是重组质粒组。不知道是什么原因？有谁做过这方面的实验，传授一下经验啊，实在没辙了。
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ha111[使用道具]
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发表于 2012-6-9 13:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

是不是你的zeocin失效了?
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qhyu[使用道具]
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发表于 2012-6-9 13:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
zeocin失效可能性不大，因为刚买来的，保存方法也正确
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dragonkilly[使用道具]
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发表于 2012-6-9 13:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你的细胞是不是肿瘤细胞?某些肿瘤细胞自身带有抗药性.
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hulu呼噜[使用道具]
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发表于 2012-6-9 13:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

是肿瘤细胞，G418抗药性是确定的，但没有zeocin抗性
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yapuyapu[使用道具]
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 小中大

建议你做个对照，zeocin说明书一般都有建议的一些细胞株，你可以拿那些细胞株做个对照，如果对照细胞株死光了，而你的细胞没死光，那肯定是你细胞本身对zeocin已经产生抗性了?
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hulu呼噜[使用道具]
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发表于 2012-6-9 13:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

事实上，楼主做转染之前就需要做预实验，把筛选浓度确定了呀
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发表于 2012-6-9 13:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
建议你做个对照，zeocin说明书一般都有建议的一些细胞株，你可以拿那些细胞株做个对照，如果对照细胞株死光了，而你的细胞没死光，那肯定是你细胞本身对zeocin已经产生抗性了?

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楼上的说的很有道理，按你的方法再试一次，如果真的象你所说的我的2215如果本身有抗性，那我岂不是前面的质粒转染鉴定都白做啦？此后的那些实验不也没法做下去？天啊！发现做细胞实验真的很费时间，一个循环就是15天，重复两次就是一个月，体力还在其次，人的耐心和信心也都耗没了。
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49888[使用道具]
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 小中大
事实上，楼主做转染之前就需要做预实验，把筛选浓度确定了呀

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转染好以后我做了几个浓度梯度，一般抗生素500ug/ml的浓度就足够了的，没料到结果会这样的
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misswu61[使用道具]
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发表于 2012-6-9 13:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

冒昧请问楼主是在读的研究生还是上班族，如果课题经费充裕的话，你也完全没有必要受这种罪，叫别人做岂不省心？导师我们为什么都称之为老板啊，因为他有经费，他有钱啊，所以一般他都不会亲自动手做实验，他只要能申请到经费就是能力，底下有一大群研究生可以为他做实验。
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