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标题:[求助]HaCaT细胞不明物质污染，各位来鉴定一下

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发表于 2012-6-9 15:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]HaCaT细胞不明物质污染，各位来鉴定一下


本人新手，培养HaCaT（人永生化表皮细胞）。刚开始长的很好，但前几天传代后，第三天培养瓶出现黑色小点，象沙子一样铺在瓶底。40X倍下观察，似乎有有活动。PBS冲洗后换液，但依然存在，估计是贴壁生长的。很奇怪，我两瓶细胞分别两次传代后，第二天培养基很清澈，但第三天出现大量黑色小点。跟黑胶虫污染不一样，实验室老师也说不是黑胶虫污染。我把细胞照片发上来，大家来鉴定一下。小弟明年毕业，现在细胞还没养活，万分着急啊。先谢过大家了！
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 小中大

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 小中大

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 小中大
我的也出现过这种情况!换液之后是清凉的,可是过一天就又变很多沙子样东西,最好的办法就是丢弃之,因为好象不能挽救!没找到这是什么污染的东西,又不象是污染,看着只是不舒服!
你的细胞状态还可以的嘛,细胞里面倒是比较干净,如果细胞里面出现黑点点的话就不行了!
我的幸好只是其中一瓶出现这个问题,其它的都没的问题!你如果细胞不多,就尽量多用PBS洗涤几次,轻轻吹打,换少量液后再观察至清凉为止,肯定不是贴壁的东西,在细胞外面应该能洗掉,如果第二天就又出现大量沙子样的话,劝你还是弃之!如果没有出现大量就一天换液一次,慢慢看对细胞生长有没有影响!
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发表于 2012-6-9 15:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
培养基变色了吗? 从形态上看,好象和我培养细胞时的情况相似.培养了三天之内培养变黄色,刚开始是少数几个,还会小范围摆动,没过几天变黄色,显微镜底下看好象铺了一层黄沙一样在细胞的上面.数量很多.双抗似乎作用不大.他们说是细菌污染.操作不当.具体是什么也不知道.染色看形态象沙门或大肠,双抗似乎没什么作用.要是具体知道是什么, 及来源就好了.我是原代培养,有点怀疑是材料问题,但也不确定,很郁闷.半年都是这样.你不是原代,细胞是购买的,应该本身不会有什么问题吧.你们实验室其他做细胞培养的情况怎么样?希望能找到原因,一起努力吧.希望明年能顺利毕业!
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发表于 2012-6-9 15:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我也遇到过这样的情况，只有换了。用抗生素基本没有用处。
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 小中大

那是污染．
如果有冻存的，重新化一管看．换新的培养基，血清，新灭菌的用具培养．继续出现，可能是细胞株本身就污染了。
我们曾经找其他实验室要的细胞，有这种情况．
细胞株珍贵，不能舍弃的话：
GIBCO 现在的Invitrogen有一种含有fungizone和其他二种抗生素的混合产品（你搜索一下），持续使用可以抑制这种污染．但是几代不用，会重新出现．所以即使保存，也要标记好．
细胞用培养基大量洗涤后，加入高浓度抗生素培养，冻存前一代减少用量；如果细胞用于转染，之前减低用量或２４小时内暂时撤除抗生素．用于持续培养的，都要加这种抗生素．
这种污染短时期内看不出影响，但是长期培养细胞形态等会有改变，不能用于研究．
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