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标题:[求助]请大家说说MTT复孔之间的数值都差多少

daod[使用道具]
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发表于 2012-6-15 10:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]请大家说说MTT复孔之间的数值都差多少



请大家说一下，你们在做mtt时，测出的复孔之间的数值一般都差多少。在570nm下测的值差多少，在490nm下差多少。
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发表于 2012-6-15 10:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我做的在490nm,复孔差别在0.01-0.03左右.
我还有一个问题请教.为什么我在做MTT时,细胞全死的孔和细胞很多的孔,测得的OD十分相近呢?这个问题很让我头疼,希望大家能帮我分析下.谢谢!
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发表于 2012-6-15 10:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我遇到过镜下看细胞密度差别很大（看起来都是活的，贴壁），但MTT数值基本一样的情况。
平行做了n个孔，都是这样，奇怪

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我做的在490nm,复孔差别在0.01-0.03左右.
我还有一个问题请教.为什么我在做MTT时,细胞全死的孔和细胞很多的孔,测得的OD十分相近呢?这个问题很让我头疼,希望大家能帮我分析下.谢谢!
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发表于 2012-6-15 10:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我们也出现过你们提到的现象，做出的mtt值和镜下观察的不太一致。你们是用的什么培养基？我们这儿换了培养基之后，原来用的是sigma的，现在用的是gibico的，我的调零孔只加了1640培养基，加入MTT后孵育4小时后，加入DMSO，调零孔的颜色很深，值和对照孔的差不多。自从换了培养基之后，一直出现这个问题。很是郁闷。我想是不是培养基的问题，但是园子里又没人提到过。希望大家分析一下。
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66小飞侠[使用道具]
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发表于 2012-6-15 10:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

测MTT前，是否将培养基吸出后，再加DMSO溶解？你可以镜检一下，加了MTT后，死了的细胞也形成晶体？如果是，那偶就不知到是咋回事啦。细胞全死的孔中，应该不形成晶体。
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发表于 2012-6-15 10:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

另外，看看 细胞数是不是种的太多或太少，96孔板最多种1*105，通常种1-5*104（具体根据自己细胞特点，这是偶的经验）比较恰当。细胞数不能太多或太少。因为在一定的条件下，MTT结晶形成的量与细胞数呈现良好的线性关系。如果96孔板细胞数种的不恰当，自然无法呈现良好的线性关系，结果当然没用差别了。
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zsxan1990[使用道具]
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发表于 2012-6-15 10:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我建议大家仔细看看自己的细胞是否是染菌了，因为细菌也可以将MTT转化成不溶性的甲簪晶体！在加入DMSO后也会溶解，这就是为什么在显微镜下看到细胞已经全死，但是OD值依然很高的原因！！所以大家要保证操作的无菌以及所加入药品的无菌性！
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发表于 2012-6-15 10:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我做的570 , 一般在0.03-0.06左右, 也有个别差极多的
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gemei0115[使用道具]
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发表于 2012-6-15 10:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我想请问下您的这个说法有无相关的国内外的文献？
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我建议大家仔细看看自己的细胞是否是染菌了，因为细菌也可以将MTT转化成不溶性的甲簪晶体！在加入DMSO后也会溶解，这就是为什么在显微镜下看到细胞已经全死，但是OD值依然很高的原因！！所以大家要保证操作的无菌以及所加入药品的无菌性！
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bamboo16[使用道具]
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发表于 2012-6-15 10:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我第一次做也是对照孔（未加刺激原）的颜色较深，OD值也比较高，但在显微镜下明显可见试验组细胞较多。第二次加DMSO前弃了上清，颜色没那么深了，但空白组OD值仍然比较高。这次我决定加DMSO前离心，如果结果还是和以前一样，就可能是其它原因了。
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