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标题:[求助]新生大鼠心肌细胞培养的问题讨论

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发表于 2012-6-16 11:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]新生大鼠心肌细胞培养的问题讨论



用胰酶消化法取新生大鼠心肌细胞，差数贴壁后培养24小时换液，大部分心肌细胞已经贴壁，且有搏动。但在伸展开并搏动的心肌细胞上面总有一些原球形亮点细胞（跟换液前漂浮的死细胞形态差不多，但是不漂浮），请问这些透明的原球形亮细胞是活的心肌细胞吗，为什么会有一部分这样形态的细胞存在？这些是活细胞吗？因为没有空间了而没有伸展开？谢谢！
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发表于 2012-6-16 11:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你所说的“圆球形亮细胞”应该是死的心肌成纤维细胞，这一点在心肌细胞原代培养中是不可避免的，只能尽可能地减少，换液后能换去一部分，但不能彻底去除。
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发表于 2012-6-16 11:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我也在培养心肌细胞，也是用胰酶消化法做的，也有你说的那种现象，不过我的不是透明的是象死细胞一样的，不知道什么原因。请问你的差数时间是多少？我每次是2个小时，成纤维细胞已经贴壁，但心肌细胞也有的贴了，沉在瓶底的有很多圆细胞，就是心肌细胞，如果象文献上所说的那样把上层的悬液转到另一个瓶子里，根本就不贴壁，我个人认为这些是死细胞，活的都沉在瓶底了，沉在瓶底的细胞根本就吸不出来，应该吹打一下吧，但又怕把成纤维细胞吹下来，不知道你是怎么做这步实验的，请你指导一下，谢谢！
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发表于 2012-6-16 11:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
如果是死的成纤维细胞，就应该漂起来了啊。可是换液后这些圆球行细胞仍然是粘在搏动的心机细胞上。我认为可能还是活的心肌细胞，只是没有伸展开。
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发表于 2012-6-16 11:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #3 wmp1234 的帖子

我每次消化13-15分钟，10次左右。后差速贴2小时，将悬液全部收集，记数后接种。细胞还不错，贴得也很好，搏动也可以。
不知道你具体是怎么操作。但我想瓶底的细胞就不需要了，而且也不应该吹打，悬液中的细胞足够了。
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发表于 2012-6-16 12:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我用的是胶原酶法消化，差速70分钟，用于差速贴壁的培养皿上心肌细胞很少了，
差数贴壁后培养48小时换液，大部分心肌细胞已贴壁，且有搏动。
我的跟你一样，也有黄色的小圆点，很多，也有附着在心肌细胞表面随它一起跳动的，但大多数处于悬浮状态，就象养的内皮细胞死了以后的模样。换液后仍有很多，不知道究竟是什么东西，
既然是悬浮状态，换液后应该少了很多才对呀？！
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发表于 2012-6-16 12:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
一般取10只乳鼠，我每次消化8分钟，消化4到5次就消化完全了，每消化完一次就吸出上清消化液，然后用含血清的培养基终止消化，最后把消化几次的一起离心1000r/min10min.消化完吸上面的消化液之前你吹打吗？我吸的时候有时会把组织吸上一些来，过200目筛网也滤不掉，所以细胞中会有些组织。差速后我把上层悬液吸出接种到一次性的瓶子里，感觉 很难贴壁，过几天才有一些贴的，还有你传过代吗？
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发表于 2012-6-16 12:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
８分钟时间可能短了些，我每次消化后就立即离心，４度，１０００转，５分钟，然后将每次离心的细胞收集。消化之前不吹打。吸上一些组织是难免的，在以后的换液时可以除去。心肌细胞不传代。
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发表于 2012-6-16 12:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我也有，在伸展开的心肌细胞上有随其一起搏动的圆形还透亮的细胞，我也觉得是心肌细胞，至于到底是活的还是死的真搞不清楚？
至于是不是没有空间了而没有伸展开，应该不太像 ，我每次做5只老鼠，种在6孔板三孔，感觉空间还是足够的啊 。有没有战友指点一下啊！
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vvmmoy[使用道具]
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发表于 2012-6-16 12:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我也打算养心肌细胞,请问大概多长时间能养好了,是不是挺难养阿,因为我时间短,只有半年的试验时间
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