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标题:[求助]流式细胞仪检测细胞周期是否需要鸡红细胞作参照？

lagua123[使用道具]
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发表于 2012-6-16 13:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]流式细胞仪检测细胞周期是否需要鸡红细胞作参照？


请问，我用PI单染HL-60细胞，然后用流式细胞仪检测细胞周期，了解细胞的增殖情况，是否需要鸡红细胞作参照？
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yychen[使用道具]
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发表于 2012-6-16 13:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
不用，标准微球做完laser alignment（光路校正）就可以了。
尽量把微球的各色CV值控制在1.5以内。
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lagua123[使用道具]
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发表于 2012-6-16 13:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

非常感谢楼上的帮助，请问有文献写的：在PI单染细胞后，用流式细胞仪检测前，需要鸡红细胞或人淋巴细胞等进行标准化，这是用来检测什么的呢？
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summerxx[使用道具]
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发表于 2012-6-16 13:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

确定二倍体细胞的位置
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lagua123[使用道具]
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发表于 2012-6-16 13:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢
那么是不是可以这样认为：用流式检测细胞周期时不需要用鸡红细胞或人淋巴细胞等进行标准化，如果需要加上确定二倍体细胞的位置，那么必须要用鸡红细胞或人淋巴细胞等进行标准化？
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summerxx[使用道具]
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发表于 2012-6-16 13:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

如果只做HL-60细胞株,无需鸡红细胞或人淋巴细胞.通常临床上做肿瘤组织时,必须用,以确定是二倍体肿瘤,还是异倍体肿瘤.但在做周期检测时,必需将仪器的光路和流路调整好(即用标准微球调整, 做流式的老师都知道). 检测速度不要太快.否则CV会较大, 粘连细胞较多.
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yychen[使用道具]
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发表于 2012-6-16 13:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
理论也有旧的和过时的理论，我们需要在实践中修正乃至替代它们。
根据我的实际操作经验，现在不再需要标准化细胞确认二倍体位置的了。
很难想象一个操作员不懂得怎么样调节电压移动荧光强度位置，并迅速识别周期分布。二倍体和异倍体分布也是可以通过操作员经验判断加上专业分析软件判断出来的。
样本细胞粘连与否由细胞特点和制备过程决定，不由检测过程决定的，跟检测速度无关。至于检测速度，其实是视乎细胞状态的，例如C6和CNE2，都是很容易分散为单个细胞悬液的，我试过上到3000甚至更多都不会对周期分布产生不良影响。如果分散不良，本身就不应该上机，因为流式的检测原理和机器构造决定了易粘连和团聚的细胞样本既不具备实际可检测性，也不具备数据正确性，如果硬要上的话，为了怕堵管道还要加压，是不可能降低上样速度的。
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lagua123[使用道具]
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发表于 2012-6-16 13:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢summerxx的帮助。我现在知道问题的答案了。
因为我单位刚买了流式细胞仪，操作员还没有做过检测细胞周期的试验，所以我们需要边学习，边试验。
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summerxx[使用道具]
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发表于 2012-6-16 13:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
可以让操作员联系厂家的技术支持.
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jujuba[使用道具]
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发表于 2012-6-16 13:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
麻烦问下可以赠点HL－60细胞给我吗？我急需要，有K562,Junkat细胞可以交换。谢谢。我在广州
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