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标题:[求助]心肌细胞数量

vcve[使用道具]
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[求助]心肌细胞数量



请教各位大虾,在培养新生大鼠心肌细胞时,5只幼鼠心脏经胰酶消化后可获得大约多少数量的心肌细胞?96孔板接种心肌细胞检测MTT时,10只幼鼠的心脏够吗?希望做过的战友迅速回复,非常感谢!
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utt0989[使用道具]
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5只乳鼠如果消化完全的话,至少可以得到5*10^6的细胞数,以10^5/孔种96孔板,10只可以种至少4块板。
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vcve[使用道具]
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请教我现在做心肌细胞的MTT检测,镜下看见结晶,但是OD值却小,即OD值与形态观察结果相反。我怀疑是细胞数较少。我用5只老鼠心脏细胞只接种1个96孔板,细胞数应该足够了。你能帮忙解释吗? 谢谢 !!
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bananapeople[使用道具]
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如果你镜下观察到的和结果相反,我建议你用酶标仪测一下标准曲线,验证一下,因为我们实验室曾经因为设置问题,测的值和结果完全相反,如果不是仪器的问题,你再回来找细胞的问题。
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leifengta[使用道具]
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我十五只乳鼠才接种了一个60mm的皿,而且密度还不是很大,师兄说十只鼠就可以种三只60mm的皿,心肌组织消化四次就都消化完了,一点不剩啊,我接种前用滤布过滤了下应该影响也不是很大吧,为什么细胞这么少呢?不知道哪一步丢了细胞,会不会是离心时转速低了,细胞没下来呢,加含血清培养基终止后我用的是800转10分钟,然后PBS洗了再1000转8分钟,应该不小了吧?转速再高我怕会损伤细胞。请教了!
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is2011[使用道具]
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我5只新生大鼠能种2个60mm dish
离心800转 5min已经就够了
用200目的过滤,
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vcve[使用道具]
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请问你们是做完原代培养后直接上板吗?那怎么计数啊?有些细胞是不能成活的即不贴壁的。还有就是我这次做的里面有好多组织,过滤了200目的筛网也不行,请教各位了。
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831226[使用道具]
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新生大鼠肯定够的,你消化也完全了,就是太快,3次???我至少10次以上(所以很累),可能是酶液或吹打太过了,最近猛做流失和提蛋白,8只老鼠能种3个48孔板和几个皿吧,不要急。消化同时就可看见终止的离心管下有沉下细胞(当然也有组织块),养完,差速后直接上板,我也不加brdu,24h换液,不贴的活性也不好,不如冲走。种板只是滴在玻片上看看,因为以前计数,感觉计数板不准(买的不好吧),不仅看看细胞数量,而且可以判断细胞状态,有无吹打开,膜光亮否等,总体判断。
计数就数一个大格*10000也可以大致判断一下。
还要看老鼠天数了,2天比较好,3天的可能会多些,但养的越久状态越差,一天太小,数量少,而且长的慢,不过比较干净,后来就状态好了,根据实验要求选吧
祝实验顺利
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vcve[使用道具]
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大家差速的时间是多少啊?大家所有的心肌细胞都贴壁吗?
没贴壁的冲掉?那接种的数目不就不均一了吗?我们差速用两个小时,可是吸走的上层都不贴壁,活细胞没有,是不是时间不对啊?请以上战友多多指点,不胜感激。我急啊!
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vvmmoy[使用道具]
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两小时没问题,是不是消化时间太长损伤了心肌细胞导致活力不行甚至死了,从而不贴壁
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