液相色谱

我最近在摸索丙戊酸钠血药浓度HPLC测定，按照文献的苯溴乙酮为衍生化试剂，三乙胺为催化剂，环己烷羧酸为内标，检索丙戊酸钠血药浓度，检测了有段时间始终做不出。

院子里面有没有高人做过丙戊酸钠血药浓度HPLC测定方法？

有的话能不能谈一下测定条件。

谢谢！

目前在做，结果一直很好，方法可能和你的一样。
取 150ul血清，加入1M硫酸0.1ml酸化，再加入含内标环己烷羧酸（40ug/ml）的正己烷提取液0.5ml漩涡提取2min，2000r/min 离心10min后取上清液100ul，加入10%三乙胺乙腈液100ul，加入衍生化试剂2-溴-4-硝基苯乙酮（40ug/ml）40ul，混匀后密闭，于45摄氏度的水浴中反应15min，氮气吹干，残渣加入100ul甲醇溶解后进样20ul。色谱条件：C18柱（4.6*150mm),流动相甲醇：水（75：25），流速1.0ml/min，柱温室温，检测波长265nm。

谢谢指导，我还想请教一下，
1.你们丙戊酸钠标准品配置是用直接用甲醇配制的还是用到了氨水配置？
我查过药典甲醇溶解度不错的。但许多文献都提到了加氨水配置。
2.你用检测波长265nm，仪器是紫外检测器还是二极管阵列检测器？
我看到不少仪器是二极管阵列检测器。
3. 混匀后密闭，45摄氏度的水浴中反应15min。
密闭、对温度和水浴时间要求比较精确，是不是防止丙戊酸钠挥发啊？
4. 我们单位没有氮气吹干装置，我把文献的45摄氏度的水浴给提高到56度，
水浴了仅两个小时，才挥干，估计这个条件可能把丙戊酸钠给挥掉了。
5. 另外你们做的线性范围是多少啊？
不好意思，又请教了这么多问题，谢谢！

1,丙戊酸钠在水中溶解度相当好啊，我是直接用蒸馏水水配制的。
2，是否是二极管或紫外检测器这个好象没有什么关系，衍生化后生成的产物的在265nm处有吸收峰，我们用的二极管陈列检测器，其紫外吸收峰是我用二极管陈列扫描得到的。
3，不是丙戊酸钠挥发，因为提取时己经酸化，提取液中是丙戊酸，是防止丙戊酸挥发，反应时间与温度是此条件下反应己基本完成，无需更高的温度与更长的反应时间。
4，氮吹是必须的，氮气为惰性气体，氮吹一是可以保护反应产物，二是加速溶剂挥干速度。
无需氮吹仪，自己可以做一种简单的氮吹装置。高纯氮气市场上一般有卖，一般的医院好象也要用到高纯氮气，这个应该比较容易得到。氮气为高压储存，所以还需弄一个减压装置，自己再减压装置外接一小截橡胶管，再接一个玻璃三通管，就可以再分出两根橡胶管，如果样品量不大，就可以直接将这两根橡胶管留长一些，前端再接一根玻璃吸管，用夹子把玻璃吸管夹住，用以调节吸管在氮吹时在试管中的长度，一个简易的氮吹就做成了，如果样品量比较大，你还可以用三通管多分几根出来。（在我们没买氮吹仪之前，一直用的是这种装置，我一般分4-6根管子出来，需要的是一瓶高压高纯氮气、一个减压装置、几个玻璃三通管、几米橡胶管（医用乳胶管也行）、几根玻璃吸管、几个夹子）
5，线性范围，我做的是5-200ug/ml，我认为这个范围足够满足临床检测需要，就没有做更大的范围了。

我看文献上都说丙戊酸钠没有紫外特征吸收，那么检测波长是怎么确定的呢？文献里波长有248nm、262nm、213nm等，看来我也要去亲自去做一下了。