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标题:[求助]细胞培养

c86v[使用道具]
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发表于 2012-6-19 12:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]细胞培养



我最近在养BPH患者的前列腺间质细胞，原代培养到现在已经一个多月了，为什么我的细胞感觉一直都没有长呢？是不是需要生长因子？
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zwsyrt[使用道具]
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发表于 2012-6-19 12:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

细胞不生长注意以下原因：
1.培养液的问题：pH值，血清浓度，是否污染
注意pH要在7.20左右，宁酸勿碱。
血清浓度是否过低
是否存在污染
2.胰酶消化问题
是否存在消化过度，或胰酶中未加EDTA
3.传代密度
细胞密度过低，不利于细胞生长，细胞可分泌促进彼此生长的因子，密度在50%以上涨的会快些
建议：
1.检测PH值，最好用PH计，作调整，宁酸勿碱
2.提高血清浓度，刺激细胞生长，生长起来后，再慢慢调回原来的血清浓度。
3.注意胰酶不要消化过度，吹打要轻柔
4.传代密度可以掌握，根据细胞生长情况调节，如果需要快长，就需要高密度，高融和度
5.适时适量的加一些生长因子
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wood533[使用道具]
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发表于 2012-6-19 12:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我做的小鼠的间充质干细胞很不好消化，我的胰酶未添加EDTA，我查书上写的0.25%胰酶中 以1比1的比例添加0.02%的EDTA。我想请问楼上0.02%的EDTA是将0.02g的EDTA加到100ml纯水中吗？
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c86v[使用道具]
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发表于 2012-6-19 12:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

是，质量体积比，g/ml
胰酶的配方： 0.25%浓度

0.25g胰蛋白酶粉末
加入50mlPBS溶液（已调PH值至7.2）
加入EDTA粉末0.02g,定容至100ml
四度保存
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园丁##[使用道具]
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发表于 2012-6-19 12:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
告诉你一个简单的方法，
1.配1%T,除菌备用。分装，-20度保存。
2.配0.2%EDTA液，除菌备用。分装，-20度保存。

传代时配双酶消化液；

1%T 1.0ML
0.2%EDTA 0.4ML
D-HANKS液 2.6ML 混匀，即可（含0.25%T+0.02%EDTA）
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leifengta[使用道具]
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发表于 2012-6-19 12:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
是，质量体积比，g/ml
胰酶的配方： 0.25%浓度

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0.25g胰蛋白酶粉末
加入50mlPBS溶液（已调PH值至7.2）
加入EDTA粉末0.02g,定容至100ml
四度保存
用纯水定容还是PBS?但是我的胰酶是已经配好的只能往里加配好的EDTA
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leifengta[使用道具]
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发表于 2012-6-19 12:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
告诉你一个简单的方法，
1.配1%T,除菌备用。分装，-20度保存。
2.配0.2%EDTA液，除菌备用。分装，-20度保存。

传代时配双酶消化液；

1%T 1.0ML
0.2%EDTA 0.4ML
D-HANKS液 2.6ML 混匀，即可（含0.25%T+0.02%EDTA）

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配的时候用纯水还是PBS？方法不错，谢谢共享哦
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baidukk[使用道具]
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发表于 2012-6-19 12:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复楼上的，配液最好是用D-HANKS液，PBS也行。
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leifengta[使用道具]
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发表于 2012-6-19 12:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
回复楼上的，配液最好是用D-HANKS液，PBS也行。

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我指的是配胰酶和EDTA的时候，也是用D-Hanks液吗
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nn255[使用道具]
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发表于 2012-6-19 12:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

配胰酶和EDTA时用D-HANKS液，请不要用纯水。
用水配会造成双酶消化液的渗透压有问题，对细胞产生破坏。
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