[分享帖]细胞消化胰酶的配制

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标题:[分享帖]细胞消化胰酶的配制

二子[使用道具]
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发表于 2012-6-20 13:30 资料个人空间短消息加为好友

小中大

适用于，无师兄、师姐、非细心、单独开展细胞培养的实验者

对一般细胞 0.25% 胰酶(胰蛋白酶，Trypsin)
配方：100ml PBS,0.25g胰酶
步骤：1先配100mlPBS(1000mlPBS:8.0gNaCl,3.4785gPO4HNa2·12H2O
/2.9gPO4HNa2 ,0.2gKCl,0.2gPO4H2K溶于1000ml蒸馏水)
2 称胰酶0.25g
3 加入PBS中，低速搅拌〈4h冰浴中,或者4℃过夜
低速搅拌0.5h冰浴中
4 调PH7.4
5 仍在冰浴中
6 过滤，分装，-20℃保存，4℃短期内用完
tip:低速很重要，机械搅拌对酶是一种冲击，如果起沫，
酶就变性了。低温，防止酶失活
对难消化的细胞：在上述配方中，加入0.02g的EDTA(0.02%)
tip:因为EDTA可以络合Ca2+，增加消化效力

remenb[使用道具]
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发表于 2012-6-20 13:31 资料个人空间短消息加为好友

小中大

顶一个！
不过我们用hanks配制胰酶

biabiade[使用道具]
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发表于 2012-6-20 13:31 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 remenb 于 2012-6-20 13:31 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
顶一个！
不过我们用hanks配制胰酶

应该是Ｄ-Ｈａｎｋｓ吧．

cocacola[使用道具]
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发表于 2012-6-20 13:32 资料个人空间短消息加为好友

小中大

好是好，不过你的分子式写错了，PO4HNa2应为Na2HPO4，PO4H2K应为KH2PO4。这种错误好像不该出吧。

woshituzhu[使用道具]
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发表于 2012-6-20 13:32 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我用的是EBss配的.

yueban-1147[使用道具]
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发表于 2012-6-20 13:32 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 cocacola 于 2012-6-20 13:32 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

好是好，不过你的分子式写错了，PO4HNa2应为Na2HPO4，PO4H2K应为KH2PO4。这种错误好像不该出吧。

呵呵，经典提醒。
我的一位大学老师，有机化学，我称之为董，呵呵。
前几天，和前辈聊，他说：你学了那么多学科，还接触过很多实验，应该在科研上很有前途。
我说：等我自己积累到一定程度，就能把昨天的东西也发挥上。
董，你的提醒，促使我加强这个意识！

04906[使用道具]
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发表于 2012-6-20 13:32 资料个人空间短消息加为好友

小中大

好！
提醒一点，一定要分装成小瓶！2~3次即用完！不然胰酶失活，你会很麻烦！

zzzz[使用道具]
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发表于 2012-6-20 13:33 资料个人空间短消息加为好友

小中大

顶一个！
不过我们用hanks配制胰酶

————————————————————————————

胰酶是不能用hanks的,应用D-hanks,不能有钙镁离子

fsdd817[使用道具]
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发表于 2012-6-20 13:33 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我们都用PBS配置，然后加EDTA。方法如下：
PBS100ml+250mg胰酶+0.02EDTA
消化作用很快，加EDTA对细胞毒性较小。