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标题:[求助]从培养瓶传到6孔板怎么传

阿k[使用道具]
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发表于 2012-6-20 13:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]从培养瓶传到6孔板怎么传



各位前辈我是培养细胞的新手,所以问的问题比较愚昧,我想做细胞转染,可从培养瓶传代到6孔板不知道怎么传.谢谢大家.小妹等着大家的回复.
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shenkunjie[使用道具]
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发表于 2012-6-20 13:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你既然养细胞，就一定要做好准备，学习一定的细胞培养的基本知识。
先消化，然后细胞计数，看你是用什么方法转染，然后确定细胞数。
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yapuyapu[使用道具]
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发表于 2012-6-20 13:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
论坛里有好多细胞培养的知识，去看看吧
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阿k[使用道具]
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发表于 2012-6-20 13:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

磷酸钙转染法,6孔板每孔需要多少细胞数,谢谢大家.
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dongdongqiang[使用道具]
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发表于 2012-6-20 13:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

先用胰酶消化细胞，分散成单细胞悬液，计数，然后稀释到需要的浓度，接种就OK了
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TAT[使用道具]
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发表于 2012-6-20 13:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

不同细胞接种量不同呀，一般转染需要60－80％左右的细胞吧，接种24小时后转染。
你自己需要摸索一下实验条件，就是细胞消化\计数，不同浓度接种，然后第二天镜捡观察，找到适意细胞接种量。
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8princess8[使用道具]
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发表于 2012-6-20 13:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
不是很严格的话，换算一下面积，照着相应比例传代就是了！

不然就计数好了！
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moonlight45[使用道具]
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发表于 2012-6-20 13:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请谨慎有胰酶，消化的时间要掌握好。要不对细胞的损伤很大，我直接用细胞刮的，效果满好的　。
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49888[使用道具]
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发表于 2012-6-20 13:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我用了很久的胰酶没那么可怕！
培养瓶传代要用弯头吸管！步骤：
1，倒掉瓶内培养液。1XPBS洗两遍！
2，加入37度预热胰酶2－3毫升！
3，倒置显微镜下观察，细胞由伸展变突起，摇晃培养瓶可见少量漂浮细胞
4，弃掉胰酶，加入培养液终止，弯头吸管吹打，直至细胞完全脱落！
5，吸取1毫升培养液细胞计数，六孔板细胞数你搜索下，由不同说法！105或106
6，稀释细胞种板，每孔两毫升！
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阿k[使用道具]
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 小中大

谢谢各位前辈,小妹真是很感动.因为我做的是293细胞磷酸钙转染,AAV载体已经构建完了,准备用293包装.总之,谢谢大家关心!我会好好向大家学习的!
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