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标题:[求助]正常贴壁生长细胞突然不明原因集体脱壁!

hustwb[使用道具]
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[求助]正常贴壁生长细胞突然不明原因集体脱壁!



昨日上午观察时,还正常!肉眼可见云雾状细胞贴壁生长,个别地方可见明显白色细胞团(像菌落一样),镜下核仁清楚。打算换液后明日传代!下午换液时,加入D-HANKS液洗立刻由酒红变橘红色,吸出洗液时肉眼见吸管中多量白色漂浮物,以为细胞代谢快,代谢产物多,又加了一次D-HANKS洗,见大量贴壁的细胞层脱落,滑下,之后换了完全培养基观察,镜下观察几乎没有贴壁细胞,细胞莫名其妙脱落,比胰酶消化还快!为排除霉菌污染,单独放置,今日观察,未见污染迹象,不知细胞是何原因突然整体脱落死亡!
敬请各位大侠指点!
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dog002[使用道具]
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D-HANKS PH值不对,应该是偏高了,你好好检查一下!
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如下原因应该考虑:
1.缓冲液的pH值
2.缓冲液从冰箱内拿出后要室温恢复温度才用,过冷的缓冲液冲洗会导致细胞脱落
3.细胞培养时间过长或传代次数过多
4.你的细胞长的太满了,细胞长到80-90%就要处理
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nn255[使用道具]
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你所见到的白色细胞团,所谓象菌落一样,是即将死亡的细胞,细胞用平衡盐溶液冲洗的时候,脱落下来的都是你的细胞,只能说你的细胞已经长过了,过了对数生长期,生长的活力和帖壁的能力已经下降
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shenkunjie[使用道具]
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其实你观察到的细胞团已经说明你的细胞有漂浮,开始死亡了。昨天如果换液可能还好,能留住些细胞。可惜啊!估计是你的溶液出问题了或者是细胞长得太密了。你同时培养的其他瓶里的细胞怎么样?如果都飘起了还是要考虑所用液体(培养基及所用缓冲液)的问题,如果就这一瓶细胞这样子,估计是细胞太密了,就死了。
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jrwyyplt[使用道具]
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你所见到的白色细胞团,所谓象菌落一样,是即将死亡的细胞,细胞用平衡盐溶液冲洗的时候,脱落下来的都是你的细胞,只能说你的细胞已经长过了,过了对数生长期,生长的活力和帖壁的能力已经下降

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可是之前养的其他瓶的细胞也都是到这个状态才准备传代的啊!而且主要是在镜下观察:成片生长的细胞群之间没有连接好,所以打算缓一天再传代的!没想到变化这么快,早上看还好,下午就集体覆没了,请问细胞长过了也会变化这么快吗?
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jrwyyplt[使用道具]
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如下原因应该考虑:
1.缓冲液的pH值
2.缓冲液从冰箱内拿出后要室温恢复温度才用,过冷的缓冲液冲洗会导致细胞脱落
3.细胞培养时间过长或传代次数过多
4.你的细胞长的太满了,细胞长到80-90%就要处理

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原因1、2应该可以排除,同时换液的另外3瓶都正常生长;
原因3:请问细胞传代多少算次数过多啊?我养的是肿瘤细胞系。
原因4:这瓶细胞如果从覆盖瓶底的面积看可能还未达到80-90%,不过有的地方似乎有点拥挤,细胞似乎有重叠生长的状况。不过,之前也有养到这个程度的细胞,可是还都正常传代了,没有提前出现这种情况。
敬请指点!谢谢!
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jrwyyplt[使用道具]
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其实你观察到的细胞团已经说明你的细胞有漂浮,开始死亡了。昨天如果换液可能还好,能留住些细胞。可惜啊!估计是你的溶液出问题了或者是细胞长得太密了。你同时培养的其他瓶里的细胞怎么样?如果都飘起了还是要考虑所用液体(培养基及所用缓冲液)的问题,如果就这一瓶细胞这样子,估计是细胞太密了,就死了。

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我观察到的细胞团是固定的,并没有随培养液的波动而漂浮啊!而且之前养的细胞也有生长到这种程度的,甚至比这瓶的细胞团还要明显的!难道真的是换液晚了?上午观察还好,本来打算上午换液的,只是延迟到了下午,就会变化这么迅速啊?
敬请指点!
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chuntian1983[使用道具]
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那就可能是上午观察的时候污染了。
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hustwb[使用道具]
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那就可能是上午观察的时候污染了。

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不会啊,那个瓶子我现在还留着呢,现在都还是清亮的,除了剩余的漂浮的细胞层,没有污染迹象啊!
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