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标题:[求助]为什么单单一种细胞总污染

zwsyrt[使用道具]
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发表于 2012-6-24 09:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]为什么单单一种细胞总污染


我一起培养的三种细胞,为什么只单单一种细胞总污染,而其他两种细胞没事.取材是SD大鼠,在一个实验过程中,相同的操作,而且这种我需要的细胞还总是最先取材,冲洗,消化,接种,其他两种放在后面做,都是在同一个培养皿操作,可是完成后镜下观看时,其他两个皿干干净净,第二天就有细胞贴壁,第三天细胞很多,而这个细胞在当时看时,就有很多小黑棒棒状\黑线状东西,过夜后,没有贴壁细胞,黑棒棒状\黑线状渣子增多,这是怎么回事?我快要崩溃了.
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cj_mondy[使用道具]
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发表于 2012-6-24 09:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
1. 材料来源部位易于污染或不易消毒彻底!
2. 第一次出现这种情况吗?可能系培养皿本身的污染所致.
个人看法,供参考!(如果允许的话,下次先做另外两种细胞,看看污染是否总是发生在第一次取材的细胞.)
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eric930[使用道具]
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发表于 2012-6-24 09:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

这种情况不一定是污染的原因，如果是明显的污染，过夜后会发现培液浑浊，乳白色絮状物，而不是黑棒棒状\黑线状渣子样的东西，这些东西可能是过滤下来的组织碎片等杂质。
请问你提取的三是同一组织中的三种细胞还是三种不同组织中的三种细胞？是用滤网过滤的方法提取细胞吗？是否知道可以获得的预期细胞数？这些问题对解答你的疑问很重要。
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 小中大
谢谢您的分析.
细胞过夜后的确没发现培养液浑浊或有絮状物,但是没有细胞贴壁,而且细胞很少,形态也不好,我想可能是消化时间过长了.
三种细胞均来自于大鼠口腔,是牙齿的牙囊,磨牙胚,和下切牙胚.消化后没有用滤网过滤.牙囊细胞数应该很多,后两种数量甚少,只是培养皿底部的几坨细胞集落.
谢谢.
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发表于 2012-6-24 09:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
1. 材料来源部位易于污染或不易消毒彻底!
2. 第一次出现这种情况吗?可能系培养皿本身的污染所致.
个人看法,供参考!(如果允许的话,下次先做另外两种细胞,看看污染是否总是发生在第一次取材的细胞.)

————————————————————————————————————————————————————————————————

谢谢.
材料的来源部位的确是极易污染的,是在口腔中,我通常把头取下后放于75%酒精中消毒5分钟,再分出上下颌骨后放于75%酒精中消毒10分钟,取出的组织用0.01M PBS冲洗.
这种结果重复出现了3次之多.
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cj_mondy[使用道具]
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 小中大
谢谢您的分析.
细胞过夜后的确没发现培养液浑浊或有絮状物,但是没有细胞贴壁,而且细胞很少,形态也不好,我想可能是消化时间过长了.
三种细胞均来自于大鼠口腔,是牙齿的牙囊,磨牙胚,和下切牙胚.消化后没有用滤网过滤.牙囊细胞数应该很多,后两种数量甚少,只是培养皿底部的几坨细胞集落.
谢谢.

————————————————————————————————————————————————————————————————

相互交流吧，只代表个人的想法。涉及专业知识，有些不很确切，牙囊组织软组织比较多吧，相对也容易消化，可以缩短消化时间。另外如果皿底是铺满了描述的棒状杂质，可能系消化下来的杂质过多，细胞沉积在下面无法观察到，且使细胞无法同培液充分接触而营养不良，更加不易贴壁。如果杂质确实太多，建议滤网过滤一下。如组织中细胞数多，细心观察在黑棒样杂质间隙应该能看到细胞，第二天小心换液，连续培养三天，细胞应该能长出来了。版助谈的污染问题也需要重视，希望没有误导你，仅供参考！
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 小中大

我在５月３０日又做了一次原代,但是在镜下看时,还是满视野的小黑渣子,当时失望极了,但是还是放在孵箱里,5月31日看时,只偶尔有零星细胞贴壁,今天看时已有挺多的了(如图),但是渣子还一如既往,培养液清亮,不象污染,所以我想很可能是消化时间过长所致.请有经验的老师帮我分析一下.
谢谢.


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 小中大
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cj_mondy[使用道具]
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 小中大

不是污染，这是正常现象！从软组织提取细胞，必然会产生一些细胞碎片和其它的杂质碎片，碎片很细小，在镜下表现为小黑渣子。从图片看，这些细胞数还可以，状态也不错，已经贴壁生长了。原代细胞生长较慢，在体外需要较长的适应时间，所以要有耐心，很多时候，细胞就是“躲了”起来，扔掉就全没了，耐心的养几天，细胞就会从杂质里长出来了，现在就是见到曙光了啊！再过3-4天，就能长满了。小黑渣子不必担心，正常换液即可，长满后，消化下来细胞进行离心，传代种板，小黑渣子就没了（如果仍有残留，再传一次代就应该清除掉了）！细胞适应了体外环境，传代后生长速度会明显增快，就可以做后续的正常实验了。祝实验顺利！
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zwsyrt[使用道具]
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发表于 2012-6-24 09:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢您的分析和鼓励,我很高兴.
再请教一个问题,这时贴壁的细胞数量不多,换液时会不会把很多潜在能贴壁的细胞丢掉了?
谢谢.
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