细胞世界 » 讨论区 » 经验共享 » [求助]关于DMEM的pH值疑惑

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 18  1/2 12››
 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:[求助]关于DMEM的pH值疑惑

fklo83[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 76573
精华 0
积分 344
帖子 368
信誉分 100
可用分 2661
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-7
状态 离线
1

发表于 2012-6-24 10:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]关于DMEM的pH值疑惑



我用的是gibco的高糖DMEM粉剂，配成1L后加了2.4g的碳酸氢钠(说明书上说要加3.7g,因为之前听别人说过会偏碱,所以减少用量)，室温下测pH是7.8，用了不少1NHcl才调到7.2。
还是心存疑惑——
1、细胞培养箱里面的温度和二氧化碳分压都和外面不同，在外面调到7。4，放进培养箱不是又变了么？
2、曾经看过一些材料说gibco说明书里面所写的3。7g碳酸氢钠是针对10％二氧化碳分压而定的，如果是5％二氧化碳的话，则要减半为1。85g，请问各位高手，你们用的是百分几的二氧化碳培养呢？都是加3。7g碳酸氢钠吗？
顶部
131415[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 74126
精华 0
积分 565
帖子 789
信誉分 100
可用分 4798
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-6
状态 离线
2

发表于 2012-6-24 10:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你的DMEM是不是含有HEPES的？如果含会非常不好调，DMEM颜色就是会偏深一点，我们一直就是按说明加培养没有问题。
顶部
zranqi_1[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 77471
精华 0
积分 409
帖子 497
信誉分 100
可用分 3298
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-17
状态 离线
3

发表于 2012-6-24 10:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我没有加HEPES,加了碳酸氢钠大约3g/L,出来的pH值确实有点高,大约7.4,更可怕的是放一段时间后pH值更高了!放在5%二氧化碳灭培养箱里都没变过来,下次确实要认真对待这个问题,因为细胞长的很不好.建议2g/L碳酸氢钠就可以了,不行的话再加点灭过菌的8%碳酸氢钠溶液.
顶部
小鱼鱼[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 73389
精华 0
积分 276
帖子 331
信誉分 100
可用分 2361
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-9-22
状态 离线
4

发表于 2012-6-24 10:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我定购的是Bibco的DMEM高糖培养液（500ml一瓶），不需要自己配制
细胞培养箱内CO2的浓度为5％
顶部
fklo83[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 76573
精华 0
积分 344
帖子 368
信誉分 100
可用分 2661
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-7
状态 离线
5

发表于 2012-6-24 10:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
难怪我以前配置DMEM的时候颜色偏深，用试纸测PH为7.2左右，过滤了以后颜色更加深了。我就是按照说明书上加的3.7G碳酸氢钠，CO2浓度为5%。
看来下次要少放一点了。
顶部
ha111[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 72969
精华 0
积分 821
帖子 1239
信誉分 101
可用分 7048
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-9-16
状态 离线
6

发表于 2012-6-24 10:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我的DMEM只加了1.5g的碳酸氢钠
但觉得放一段时间以后颜色还是变得红得厉害
不过还好样的细胞粗生粗养，似乎活得也还好
顶部
dotaaa[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 74170
精华 0
积分 461
帖子 621
信誉分 100
可用分 3880
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-7
状态 离线
7

发表于 2012-6-24 10:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

关于DMEM的pH值变化的原因是这样的：DMEM的干粉培养基，3.7g是对应二氧化碳培养箱的二氧化碳浓度设定在10%，而5%的则对应的是1.85g碳酸氢钠。暴露在空气中的培养液，因为大气中二氧化碳的浓度很低，低于5%，所以液体的PH值也逐渐升高，这就是它变成紫红色的原因。我的培基从刚配时的7.0升高到8.0，变成紫红色了。我知道原因后，就试了一下，把PH值为8.0的培基放到5%二氧化碳的培养箱中，过了几个小时，培基就变黄了，PH值降低了，我测了一下PH值，降到7.0了，就是说降到我当时刚配时的PH值了。
就是说大家配DMEM干粉培养基时，调PH值到7.2-7.4后，即使过一段时间PH值飞快上升，那培养基还是能用的。只是你把培养瓶放到培养箱的时候，一定要把瓶盖拧松，这样几个小时之后，PH值就恢复到原先的7.2-7.4了。当然有的人在配培基的时候，就加入HEPES，这样就能稳定PH值，因为HEPES是通过氢离子和氢氧根离子来稳定PH值，这样就不受二氧化碳浓度的影响了。
顶部
xueyouzhang[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 76770
精华 0
积分 470
帖子 640
信誉分 100
可用分 3996
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-9
状态 离线
8

发表于 2012-6-24 10:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我的DMEM配好过滤后PH不超过7.5但是细胞吹打传代后，颜色越来越变紫红色，放在5％CO2细胞培养箱中培养几天，今天测PH值8.0,中间还曾换液，不过早几天实验室培养箱CO2浓度不够，另外我的培养瓶是塞紧的因为怕污染，请问这是什么原因
顶部
gmjghh[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 75184
精华 0
积分 475
帖子 589
信誉分 100
可用分 3823
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-20
状态 离线
9

发表于 2012-6-24 10:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我的DMEM配好过滤后PH不超过7.5但是细胞吹打传代后，颜色越来越变紫红色，放在5％CO2细胞培养箱中培养几天，今天测PH值8.0,中间还曾换液，不过早几天实验室培养箱CO2浓度不够，另外我的培养瓶是塞紧的因为怕污染，请问这是什么原因

——————————————————————————————————————————————————————————

培养液变碱的原因就是瓶塞塞紧造成的，因为你没有给它接触CO2的机会.
我以前试过的，用偏碱的培养液放到培养乡里，过一会颜色会调节至正常的，同样，培养箱断气时会导致培养液变的紫红.
所以你的培养瓶还是松一两扣比较好。
顶部
ending[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76092
精华 0
积分 771
帖子 1242
信誉分 100
可用分 6981
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-1
状态 离线
10

发表于 2012-6-24 10:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
一升培养基加2.383克HEPES，2克NaHCO3 ，稍偏酸，滤过后再加一点NaHCO3 就好了
顶部
 18  1/2 12››