[求助]SH-SY5Y图片

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标题:[求助]SH-SY5Y图片

dog002[使用道具]
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发表于 2012-6-24 11:12 资料个人空间短消息加为好友

小中大

有哪位高手培养过SH-SY5Y，，请将生长良好的细胞照片发张上来，我刚从别处要了些该细胞，但贴壁后呈圆型，且较小，有点发亮，有点不发亮。不知道正常细胞形态如何？

skytree[使用道具]
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发表于 2012-6-24 11:12 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我的不是圆的
梭形或三角形
有少部分分化的成神经元的形态

yes4[使用道具]
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发表于 2012-6-24 11:13 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我养过、圆形肯定不对。神经细胞多是梭状的。圆形说明它不是很健康。因为我之前养的也是圆的。后来请教了别人后改进方法养，现在就很棒了～：）

神经细胞都很脆弱，所以如果可能，尽量不要用trypsin。我现在养PC12都是直接加medium把它们吹下来的。细胞非常健康。你可以试试。

SH-SY5Y很久以前做的了，只找到一张图片。你可以参考一下^_^

附件

2012-6-24 11:13

99072281.jpg (40.38 KB)

windy+++[使用道具]
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发表于 2012-6-24 11:13 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我的不是圆的
梭形或三角形
有少部分分化的成神经元的形态

baidukk[使用道具]
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发表于 2012-6-24 11:14 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我也养SH-SY5Y,前段时间挺好的,可是冻存了几批，复苏出来都不行。着急得很！您是不是用0.02%EDTA消化？EDTA用什么配的，PBS还是D-HANK'S?
培养基有什么诀窍吗？我看ATCC说明书上用MEM/F12+10%FBS.

ROSE李[使用道具]
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发表于 2012-6-24 11:14 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我就是直接用PBS洗后再加EDTA-Trypsin,medium也是直接用的MEM+10%FBS，感觉很好养，没有什么特别奇怪的地方，这个细胞唯一的特别就是长得比较慢，一般5天subculture一次，其它没什么特别的。现在你养的如何？？

dog002[使用道具]
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发表于 2012-6-24 11:15 资料个人空间短消息加为好友

小中大

谢谢你，我现在新买了一株，还可以。你的EDTA-Trypsin的浓度是多少？我用的DMEM/F12+10%
F可能前一阵子我们的培养箱的问题，二氧化碳的浓度不稳定，其他人的肿瘤细胞状态都不好，所以我的SY5Y就牺牲光了！

yapuyapu[使用道具]
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发表于 2012-6-24 11:16 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我养的SY-SY5Y用MEM-F12培养基，15%国产胎牛血清，卖细胞的老师说用进口10%得胎牛血清也可以，我的操作方法：将培养基吸去加入15ml离心管，加入1ml胰酶，使之覆盖细胞表面，马上吸去，若有较多细胞已经起来，将它并入离心管，轻拍培养皿是细胞脱落，培养基终止，并入离心管，1000rpm离心3min，1传2。此细胞为悬浮贴壁混合物，所以不要直接丢掉培养基，具体照片步骤详见atcc网站。离心的好处还有此细胞容易聚团，离心之后可以吹散一些

dog002[使用道具]
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发表于 2012-6-24 11:17 资料个人空间短消息加为好友

小中大

离心对细胞有机械损伤吗？1000rpm是不是太高了点？
我也仔细看了ATCC的说明，可是我一直把它当作贴壁细胞来养的，的确一直有少部分的细胞悬浮。看来得调整方法了！谢谢您！
另外换液的时候也要将悬浮的吸出离心再混入培养瓶中了？

yapuyapu[使用道具]
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发表于 2012-6-24 11:17 资料个人空间短消息加为好友

小中大

1000rpm可以的，3分钟，我们的细胞都是这样做的，若是不放心，就900rpm5 min，换液的时候理应离心，我买细胞的时候，那个老师就没有什么特别告诉我的，他的意思可能就是按一般贴壁细胞养的，我是按atcc的方法做的

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