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标题:[求助]做MTT时四周一圈的孔都要加满嘛？

laughing妹[使用道具]
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发表于 2012-6-24 11:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]做MTT时四周一圈的孔都要加满嘛？



近期准备做MTT实验，查阅了相关资料，说96孔板的四周一圈的孔由于”边缘效应“不适于养细胞，应作为空白，那是不是四周一圈所有的孔都要加满培养液哪？
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woshituzhu[使用道具]
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发表于 2012-6-24 11:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

因为96孔板价格较贵,至少对我而言哈,所以我四周也做了,不过的确如你所言,由于边缘效应,四周一圈的孔里长的细胞都偏向于一侧,如果你四周一圈不用,可以用加一定量的PBS(比如100ul).如果你要用到四周一圈的孔,建议培养时将板置于略靠近培养箱水盘的,而且将板置于层中间,尽量减少开培养箱的次数,我这样做感觉还是不错的,不会相差多少的.
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发表于 2012-6-24 11:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
1.所谓边缘效应，是指周围一圈孔的培养液由于液体蒸发和温度梯度等原因使得细胞生长状态与其他孔不同，结果造成测量值与中间孔差距增大。
2.所谓空白对照，是指在做结果分析时需要去掉的本底值。把四周孔作为空白对照孔目的在于节省耗材，没有必要四周一圈所有的孔都做为空白对照。对照的设立要看你的实验分组情况，一般使一组设一对照，如果做的是药物，那就是每个浓度设一个对照。
3.我的实验体会是周围孔确实与其他孔有较大的测量差异，建议把空白对照设在周围孔上，可以减少耗材。
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S6044[使用道具]
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发表于 2012-6-24 11:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
有的时候时间长了 比如72小时 如果周围没有加水 96孔板培养的细胞容易因为水分蒸发而影响实验结果 尽量加多一些pbs 这样好一些
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laughing妹[使用道具]
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发表于 2012-6-24 11:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

刚问了一位做过的同学，他说周边孔一定要加蒸馏水或pbs以防止蒸发，而且周边孔不用做空白对照，而是另设。我想如果要用周边孔做对照的话，里面加的应该是培养基，而不是pbs。是不是这样？
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发表于 2012-6-24 11:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

还有个问题，空白孔、对照孔、加药孔在96孔板内如何排列才合适？每种要设几个复孔哪？
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yhz1973[使用道具]
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发表于 2012-6-24 11:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

周围一圈加PBS或者蒸馏水就可以了，而且板子最好放在离水源近的一层，这样可以减少挥发。
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laughing妹[使用道具]
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发表于 2012-6-24 11:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

还有个问题，空白孔、对照孔、加药孔在96孔板内如何排列才合适？每种要设几个复孔哪？
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baidukk[使用道具]
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发表于 2012-6-24 11:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

每个药浓度最少设三个复孔，一般如果除去周围一圈孔，中间有十排孔，每排是六个孔，那么对照组可以设在中间一排，两边可以做药物浓度梯度。至于设多少浓度就根据你的实验需要了。
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laughing妹[使用道具]
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发表于 2012-6-24 11:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

那横过来做可以嘛？
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