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标题:[求助]请教怎么区分下列图片中的凋亡细胞与坏死细胞？

viviwang1987[使用道具]
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发表于 2012-6-24 11:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]请教怎么区分下列图片中的凋亡细胞与坏死细胞？



请做过Hoechst33258染色的老师、同学帮我看看, 以下Hoechst33258染色的图片中哪些细胞是凋亡细胞, 哪些细胞是坏死细胞? 先谢谢了!


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发表于 2012-6-24 11:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

第2张图片


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 小中大

第3张图片


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发表于 2012-6-24 11:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

第4张图片


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 小中大

第5张图片


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发表于 2012-6-24 11:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
建议你加PI,进行双染.如果是红色的,就是坏死的,亮蓝色的就是凋亡的.
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发表于 2012-6-24 11:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢!
我实际上用PI染过, 发现PI染色很浅, 而且在荧光显微镜下, PI退色很快, PI退色后的细胞核是蓝色的, 所以我就一直纳闷, 这退色后呈现蓝色的细胞核究竟是凋亡的细胞核还是坏死的细胞核? 是不是凋亡后期的细胞核与坏死细胞核的真正区分只能通过DNA ladder 方法鉴别. 此外, 在《细胞凋亡的分子医学》一书(超星图书馆有此书)中P474又介绍Hoechst只能染凋亡细胞核, 原文是这样说的: " 在荧光显微镜下，活细胞核呈弥散、微弱、均匀荧光，坏死细胞不被Hoechst 染色, 出现细胞凋亡时，细胞核或细胞质内可见浓染致密的颗粒块状荧光(蓝色)及明显核形态变化，如果见到3个或3个以上的DNA荧光碎片被认为是调亡细胞"。按照这样的说法, 也就是凡是被Hoechst致密浓染的细胞核都应该是凋亡细胞核. 不知道我这种想法是否正确.
由于是新手, 不懂之处颇多, 望能得到指点, 非常感谢. 另外, 传2张Hoechst33258与PI双染的照片上来, 请多多指点.
　　 双染照片1


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 小中大
　上述是低倍镜的照片, 可见浅红色, 但是在高倍镜下多观察一会, 红色便褪去了. 下边第2张照片就是在高倍镜下照的, 可见左边2、3个细胞核呈现微红色, 如果再延长观察时间, 红色褪去后, 就会呈蓝色.
第2张照片


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 小中大
用于流式细胞仪检测的染料：
PI、Hoechst、 EB、 DAPI、丫啶橙等，其中PI、Hoechst最常用。
PI和Hoechst33342双标：
PI、Hoechst33342均可与细胞核DNA（或RNA）结合。但是PI不能通过正常的细胞膜，Hoechst则为膜通透性的荧光染料，故细胞在处于坏死或晚期调亡时细胞膜被破坏，这时可为PI着红色。正常细胞和中早期调亡细胞均可被Hoechst着色，但是正常细胞核的Hoechst着色的形态呈圆形，淡兰色，内有较深的兰色颗粒；而调亡细胞的核由于浓集而呈亮兰色，或核呈分叶，碎片状，边集。
故PI着色为坏死细胞；亮兰色，或核呈分叶状，边集的Hoechst着色的为调亡细胞。
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 小中大
从你发的照片看，效果不是很理想
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