小中大[求助]养心肌细胞两个月了，很不理想，写出来请大家 指正
院子里关于心肌细胞培养的帖子 我 已经看了n遍了 ，我也做了 好多次试验，心肌细胞总是不贴壁 ，不波动 。。下面是 我的 步骤 ：
胰蛋白酶 开始用的0.125％，后来降到0.1％。取心肌剪碎后消化，我 听从一位战友把心肌盛 在青霉素小瓶放在培养箱中消化，第一次 上清弃去，每次消化时间为8分钟。每次消化后吹打数次，静止片刻 ，然后小心吸取上清置入10ML离心管中，用含有15％血清的 培养基中和胰酶，900转离心8分钟。我一般12只老鼠心脏一共消化8－10次，直至心肌组织很小或是没有。最后收集所有的离心液体，过铜网，差速贴壁。。
我的疑点 ：
1、每次消化10只老鼠用胰酶的多少毫升，中和胰酶的需要多少含10血清的培养基。
2、每次消化后 吹打。院子中有人提到剪切力问题不知是何意思。避免吹出气泡，这一点我注意了。
3、消化到第三次时开始出现蛋清样物质，不好吸上清，我估计很多朋友都遇到过，不知道你们是怎么处理的 ，我试过加大胰酶量效果也不是很好，。
4、最后一步取收集离心液过200目铜网时，总不能很顺利。液体不往下流。我曾经试着用吸管头紧压住铜网时加压能过滤一些，但是有朋友说这样会损伤很多心肌细胞的。
5、另外，对于心肌细胞不容易贴壁，我自己制作的鼠尾胶包被玻璃瓶，可是鼠尾胶液体不容易凝固，即使我用了氨水棉球中和以后也是这样的，我怀疑是我的 鼠尾胶太粘稠了，不知道你们遇到这样 的情况吗。
6、我的细胞基本不贴壁，昨天做了一批，没有过200铜网，所以有许多丝丝样 的未消化完全的大细胞团块。种植24小时后，今天看细胞发现，组织快贴壁很好中有细胞跳动了，频率大约30次/分，，可是单个的细胞却很少贴壁
7、我目前用的是玻璃培养瓶，大家有没有不用包被既养的很成功的例子
最后说明的是我的培养基用的是gibco粉装的 ，ph值没问题。。
写出来，还望院子里的专家们帮忙出谋划策，我实在是没有办法了，毕竟两个月了没有一点进展啊 ，先谢谢了
