[求助]倒置显微镜下如何观察Millipore transwell小室？

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标题:[求助]倒置显微镜下如何观察Millipore transwell小室？

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发表于 2012-6-24 13:03 资料个人空间短消息加为好友

小中大

如题！
刚刚完成预试验，用的是Millipore transwell，奥林巴斯X71倒置相差显微镜观察。结合园子里的讨论，Millipore transwell的膜好像是透明的，并且刚好今天奥林巴斯的工程师告诉说“将名片放在倒置显微镜下，镜下视野中看到的应该是朝下的一面。”那麽倒置显微镜下将小室正置在24孔板中看到的是否是室外面呢？
如果这样就可以直接在24孔板内动态观察，计数，染色？为何还要切下膜，放在载波片上观察？
（我的观察结果，刚铺完膜时镜下未见细胞，当时未在意，以为镜下为小室内面，细胞少可能是无血清诱导，活细胞减少。可是听工程师一言，是否我们看到的本身就是室外面呢？并且的确24h后每个视野中可见10-20个细胞）。
做过的战友给点意见吧！

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发表于 2012-6-24 13:04 资料个人空间短消息加为好友

小中大

顺便问一下结晶紫染色的问题，应该是0.1%的浓度吗？需要固定吗？我做时没有固定细胞，直接染色，可是发现染色后有的细胞脱落了；并且细胞开始呈紫色，但是即使纯水也能将紫色完全洗去，并不需要33%乙酸脱色？我的方法有问题吗？那麽4%多聚甲醛室温固定15分钟可行吗？
请大家帮一下忙，愿意1分转让！
谢！

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发表于 2012-6-24 13:04 资料个人空间短消息加为好友

小中大

不知你使用的是哪种规格的小室？Millipore的1um孔径聚酯膜的Inserts是透光的，所以倒置显微镜能看到小室内细胞的上部形态。之所以切下来，是因为有的人会拿膜铺在载玻片上，做免疫荧光分析。

不知是否答到点子上了？

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发表于 2012-6-24 13:05 资料个人空间短消息加为好友

小中大

把名片放在倒置显微镜上，当然只能看到朝下的一面，因为名片是不透光的。而 transwell膜是透明的，所以你聚焦时，聚到哪个面就可以看到哪个面，也就是全层都可以通过调整聚焦螺旋而看到。所以有人会把不想看的那面的细胞用棉签擦掉，这样只要观察到细胞，就说明找到了想看的那层。至于是否要把膜切下来，就要根据你的实验要求了。就象上面的战友说的，你想用荧光染色，总不能在24孔板里染吧？

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发表于 2012-6-24 13:05 资料个人空间短消息加为好友

小中大

也就是说，如果仅仅作普通染色，用倒置显微镜是可以直接观察的，对吗？
另外我确实在第一天无论怎样调节焦距，只看到了抹上的小孔；24小时后就看到了细胞，如此推论我认为我看到应该是穿过膜的细胞。可是为什麽我看不见室内面呢？

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发表于 2012-6-24 13:05 资料个人空间短消息加为好友

小中大

看下照片吧。24h的