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标题:[求助]我们的细胞到底是怎么了?

fei1226com[使用道具]
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[求助]我们的细胞到底是怎么了?



我们的细胞长的不是太饱满,传了一段时间后全部脱落死亡,怎么回事??
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fei1226com[使用道具]
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我培养的是成纤维细胞,今年一直以来,细胞都长不好,消化时间长,死细胞特别多,而且在相同的时间不能长满瓶壁。并且观察到细胞瓶壁上,在细胞生长面上总是一块不规则的没有细胞生长的部分,中央或有或无小点样东西,我怀疑是细胞破碎后留下的痕迹,如果是,为什么会出现这样的现象,本来很好消化的,为什么一下就不好消化了呢?并且现在接毒病变不明显,毒的病变不明显是不是因为细胞生长不好呢?
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lagua123[使用道具]
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是不是支原体感染??
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skytree[使用道具]
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正好我的细胞前两天也遇到过相同的问题,就谈一下我的看法:
1.看一下你的培基的PH值,是不是偏碱,因为配好的培基在空气中放置不用很长的时间就会变碱,这样倒不是问题。关键是你放到培养箱的时候,一定要把瓶盖拧松,这样培基接触到5%的二氧化碳,就恢复到你刚配的时候的PH值了。我最近就是因为这个原因,细胞突然生长缓慢,原来每天一传代,突然间不怎么长了,后来发现部分原因是PH值的问题。
2.你可以加入一点谷氨酰胺。我们实验室有的人养细胞,就是突然发现细胞状态不好了,后来加了一点谷氨酰胺以后,细胞状态就好了。因为谷氨酰胺在溶液中很不稳定,培基在配好2周以后,谷氨酰胺大部分已经被破坏,需要补加,否则细胞会生长不良。
3.你的细胞消化时间比以前长了,我估计是你的胰酶的问题。不知你的胰酶时买的成品液体的,还是买的粉剂回来自己配的。如果是粉剂的话,那么配好一段时间后,胰酶的消化能力就会下降,相应的消化时间就需要延长。
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skytree[使用道具]
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另外,当然最后要考虑到支原体污染的问题。如果是支原体污染污染的话,就只好扔掉了。如果你的实验室正好有人在做支原体的实验,倒是要注意了,很可能是支原体污染。你可以看一下实验室一起养细胞的人,又没有支原体污染的,要是有的话,那很可能就是支原体污染了,支原体污染也是很常见的,而且不容易看出来,因为培基并不变浑浊。
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fei1226com[使用道具]
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最近测了一下配前的PH值,7.35以上,过滤后立即测PH值就变成了7.45以上,放置三天变成8.0以上,是不是NaHCO3加多了,我们是密封培养的,没有CO2浓度问题。
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fei1226com[使用道具]
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细胞长期处在一个偏碱的环境中会是一个什么样的结果,会不会由于处于不利条件下,慢慢活性降低以至老化,死亡。
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fei1226com[使用道具]
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Marc145细胞图片,细胞培养面有不长细胞的空斑。


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QUOTE:
原帖由 fei1226com 于 2012-6-24 13:47 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

Marc145细胞图片,细胞培养面有不长细胞的空斑。  

细胞太密了
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fei1226com[使用道具]
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这不算是太密的,还有比这密的呢,只是我们的细胞培养面上出现了不长细胞的空斑
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