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标题:[求助]LPS刺激RAW264.7,产生炎症因子时一定要换...

ququer787[使用道具]
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发表于 2012-6-24 16:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]LPS刺激RAW264.7,产生炎症因子时一定要换...


我第一次做LPS刺激RAW264.7,产生炎症因子的造模型时，用的有血清的培液，结果正常组与各种浓度和时间点的LPS组都没有差异。
有人说加LPS前一定要换无血清的培液，因为LPS与蛋白有结合影响效力，而且有血清的培养液不能使细胞同质化，
还有些人使先用无血清的培养液培养6小时后，换有血清的，再加各种浓度LPS.
到底是哪种方法对？用有血清的，还是无血清的？
请大家帮帮我！急！马上要做第二次了。
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zranqi_1[使用道具]
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发表于 2012-6-24 16:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你确信你只用LPS就可以刺激RAW264.7细胞产生可检测出的炎症因子吗？我以前看文献都是干扰素加LPS刺激的，也有单用干扰素的，但没看到单用LPS的。我感觉但用LPS的效果应该不好，我以前做过类似的试验。
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fklo83[使用道具]
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发表于 2012-6-24 16:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

这篇文献就是直接用的LPS，无法上传，只能告诉你题目了
Propionibacterium acnes and lipopolysaccharide induce the
expression of antimicrobial peptides and proinflammatory
cytokines/chemokines in human sebocytes
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ququer787[使用道具]
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发表于 2012-6-24 16:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

文献上是只用LPS就可以刺激RAW264.7细胞产生可检测出的炎症因子,但没有提刺激时候要不要换无血清的培养基.请大家再谈谈
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BOSS2011[使用道具]
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发表于 2012-6-24 16:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
要是你需要收集上清来检测细胞因子，比如用ELISA，那在LPS刺激时就需要用无血清的，不然血清蛋白会影响你的后续检测
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发表于 2012-6-24 16:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

“是你需要收集上清来检测细胞因子，比如用ELISA，那在LPS刺激时就需要用无血清的，不然血清蛋白会影响你的后续检测 ”
我觉的有血清蛋白不会影响ELISA的检测，因为我们经常在血清中检测炎性因子的。我的意思是会不会有血清的培养基影响LPS的刺激作用？？
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cj_mondy[使用道具]
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发表于 2012-6-24 16:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我也要做这个模型啊,能一起交流吗?
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发表于 2012-6-24 16:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

可以交流,我做了第一次LPS刺激,是在有血清的培养基里,用了6个浓度,6个时间的LPS,刺激不出来,急,马上做第二次了!
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发表于 2012-6-24 16:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我们用LPS刺激过DC，血清浓度不用降低，最后检测到表面标志的明显变化。实验室的其他人也用LPS做阳性对照测细胞因子什么的，血清浓度都不需要降低。好像做信号通路时才需要血清饥饿。会不会是RAW264.7的状态不好，已经大部分分化而对刺激不敏感。我先后复了3管已经都分化了……
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 小中大

请问你的细胞对LPS 的刺激能产生NO吗?有没有做这个实验啊?
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