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标题:[求助]MTT的结果很不理想，是何原因啊？

bongte[使用道具]
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发表于 2012-6-24 18:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]MTT的结果很不理想，是何原因啊？



我做的是抗肿瘤药物的筛选，做了好几次了，操作都按照MTT的步骤，感觉没问题，但结果各浓度之间的值相差不大，且同一药物浓度的复孔值相差挺大的，如0.453,0.543,0.606等,不存在明显的剂量和时间依赖性,但看资料好多报道实验组的数据与对照组的相差很大,抑制率很高,现在很郁闷,不知什么原因,希望知道或做过的给点经验,多谢,多谢!
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mamamiya[使用道具]
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发表于 2012-6-24 18:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
既然是筛药，那么你的药是自己新合成的？还是别人已经在用的且证实有效的？
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发表于 2012-6-24 18:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我用的药不是自己新合成的，是药物公司提供的，拒报道有抗肿瘤的作用，而且看了有关对肿瘤细胞的抑制实验文献的报道，但是结果并不像预期的那样，存在剂量依赖性和时效关系，看文章中大部分都成以上2种关系！
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tianmei001[使用道具]
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发表于 2012-6-24 18:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

MTT的生成物比较难被溶解，这可能是造成同一浓度复孔差别大的原因。建议你改用MTS/PMS试以一下，比MTT的效果好。
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发表于 2012-6-24 18:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
多做几个复孔，去掉最大和最小的
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vera+[使用道具]
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发表于 2012-6-24 18:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你把细胞浓度调底一些看看，数据是小了，但是之间的差距不会很大！
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发表于 2012-6-24 18:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
非常感谢以上各位给的建议，对我的实验会很有帮助！！MTT的生成物可能能溶解吧，我用DMSO溶解，加入DMSO后再放在培养箱里十几分钟，然后再震荡20分钟，这样会溶解吗？
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发表于 2012-6-24 18:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

首先，0.453,0.543,0.606，差得不算太离谱，还是能反应真实情况的，毕竟最后结果是求平均，算抑制率。
如果药物是有效果的，那么不管你误差多大，组间差异总是能看到的，优化步骤也不过是使结果重复性更好罢了。
个人认为你的操作步骤应该没什么问题。
那么问题可能出在哪呢？
1.他人实验结果未必可信。充分相信你自己的结果。现在这个社会假货太多了。
2.细胞系不同。不同的细胞系可能对药物有不同反应。
3.药物浓度没设好。仔仔细细再算一遍药物的配制浓度，别把浓度搞错了。还有就是初筛的时候把浓度范围搞大点，等比稀释，10倍往上加。
4.培养环境。是否需要撤血清等等，仔细分析前人的实验。
5.药物本身是否有问题。公司的药物合成技术可信吗？
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bongte[使用道具]
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发表于 2012-6-24 18:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请问楼主细胞株选的是什么？一般MTT初筛会多选一些细胞株的。普筛嘛~~~
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bongte[使用道具]
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发表于 2012-6-24 18:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我今天做了MTT结果也不是很理想，请问我没有570nm ，能用490nm吗，我今天用490nm还遇到了一个问题，那就是正常对照孔都测不出来，很多孔都有1到2 的OD后来我改用双波长490和630，所有的孔都测出来了但是我不知道有没有这么测的
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