细胞世界

没注意到你用96孔板做。玻片孔太小即使爬上了染色操作也不方便。我们用24孔板做。订制圆形的玻片。比孔稍小些。

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我采取24孔板，玻片经过裁剪（原来的是18mm×18mm)，96孔板是我用相同的细胞悬液进行加药处理。

1、博士德的PLL可能稀释比例不符合要求，过浓？毒性作用？－－
做细胞培养的PLL是要用细胞培养级别的。你买的是不是一般用于免疫组化贴片的PLL？

2、酒精残留？火焰烘干后依然残留？－－没有问题，我们一直这么做。

3、PLL残留，可能性最大，汲取多余PLL，30分钟的风干（看起来光滑面干燥）措施不妥当？毒性导致细胞生长不行？－－游离的未结合到玻片的PLL是有细胞毒性的。我们用的是SIGMA公司的专用于细胞培养的PLL。是将玻片放在PLL中浸泡4H以上，之后吸去PLL，用去离子水洗3次去除未结合到玻片上的PLL。常温超净台下晾干（全部无菌操作）。

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我所用的博士德产品，也是SIGMA分装的产品。规格为7-15万，选择依据是参考园子的说法。
1、浸泡时间要4小时么？产品说明书说是5分钟就可以了，园子里面也有人说增加浸泡时间不会增加包被效果。
2、SIGMA的PLL几乎都是高纯级标志，还有一种10ML的即用型的，有写明"培养级“的么？能否将货号相告？
3、我的PLL没有写明”培养级“，有无过滤除菌的必要呢？
4、PLL浸泡后的盖玻片，肉眼可见什么不同之处么？
希望继续探讨！

我所用的博士德产品，也是SIGMA分装的产品。规格为7-15万，选择依据是参考园子的说法。
1、浸泡时间要4小时么？产品说明书说是5分钟就可以了，园子里面也有人说增加浸泡时间不会增加包被效果。
2、SIGMA的PLL几乎都是高纯级标志，还有一种10ML的即用型的，有写明"培养级“的么？能否将货号相告？
3、我的PLL没有写明”培养级“，有无过滤除菌的必要呢？
4、PLL浸泡后的盖玻片，肉眼可见什么不同之处么？
希望继续探讨！

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1.产品说明书没说用途是什么么？园子里说的是针对做培养的么？关于细胞培养的玻片包被我们的经验确是和时间有关。此外，包被时间和所用的包被浓度、培养的细胞种类有关。
2.sigma的产品目录上注明用于细胞培养的。你去查一下会发现注明用于细胞培养的产品比没标明的价格高。
3.PLL浸泡后的玻片肉眼看不出什么区别。为了省钱我们买的是粉末，如果是在配制时没有充分溶解包被洗涤后可见颗粒状。这样的玻片对有的种类细胞的培养生长是有影响的，能贴壁但生长不良。
4.此外多聚赖氨酸
a.有左旋（PLL）和右旋（PDL）。PDL对细胞的毒性更小些。
b.用于细胞培养时其聚合度大细胞更易贴壁因其有更多的负离子。但聚合度大配制时较不易溶解。

回答你的第二个问题。我也做过爬片，个人感觉95％医用酒精浸湿后在酒精灯的外焰闪过，这时一般玻片会快速燃烧。观察发现燃烧过后的确是有些液体残留，但此时如果把玻片靠近外焰，借助热力就很快可以使残留的液体挥发掉。这样处理玻片破碎的可能性很小。试试看。

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其实用100%的酒精破碎的可能性更小。