小中大同位素标记葡萄糖摄取 将12孔板中已分化好的脂肪细胞在无血清DMEM培养基中饥饿2小时,用KRP缓冲液(127 mM NaCl, 4.7 mM KCl, 0.9 mM MgSO4, 10 mM Na3PO4, 0.9 mM CaCl2)洗涤两遍,每孔加入500 μL预温的KRP缓冲液(含0.2% FFA free BSA, 10 nM insulin),37℃孵育30 min。每孔加入50 μL 3H-2-deoxy-D-glucose和2-deoxy-D-glucose浓缩液,使二者的终浓度分别为1 μCi/mL和0.1 mM,以10μM的细胞松弛素B(cytochalasin B)作为对照,计算细胞对标记葡萄糖的非特异性摄取。37℃孵育10 min。冷的PBS洗三遍终止反应。
消化细胞 每孔加入150 μL 1 N NaOH作用两小时,取细胞消化液,加入到闪烁液中,液闪计数。每升闪烁液配方:2, 5-二苯基恶唑(PPO)6 g,1, 4-双-(4’-甲基-5-苯基恶唑) (POPOP) 0.1 g,二甲苯 600 mL,乙醇 400 mL