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标题:[求助]葡萄糖转运实验

bling[使用道具]
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[求助]葡萄糖转运实验



我最近要做脂肪细胞的葡萄糖转运实验,有哪位做过吗?可以将一下实验的具体方法和设计吗?有哪些注意事项?我在文献看到都只有短短几句话,我有几个地方不解: 1.0.2%的DMEM培养基含血清吗?2.文献说加含氢3标记的2脱氧-D-葡萄糖KRP缓冲液之前,用含或不含100nmol/L胰岛素的KRP温育.到底要不要含胰岛素?恳请赐教!
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zranqi_1[使用道具]
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同位素标记葡萄糖摄取 将12孔板中已分化好的脂肪细胞在无血清DMEM培养基中饥饿2小时,用KRP缓冲液(127 mM NaCl, 4.7 mM KCl, 0.9 mM MgSO4, 10 mM Na3PO4, 0.9 mM CaCl2)洗涤两遍,每孔加入500 μL预温的KRP缓冲液(含0.2% FFA free BSA, 10 nM insulin),37℃孵育30 min。每孔加入50 μL 3H-2-deoxy-D-glucose和2-deoxy-D-glucose浓缩液,使二者的终浓度分别为1 μCi/mL和0.1 mM,以10μM的细胞松弛素B(cytochalasin B)作为对照,计算细胞对标记葡萄糖的非特异性摄取。37℃孵育10 min。冷的PBS洗三遍终止反应。
消化细胞 每孔加入150 μL 1 N NaOH作用两小时,取细胞消化液,加入到闪烁液中,液闪计数。每升闪烁液配方:2, 5-二苯基恶唑(PPO)6 g,1, 4-双-(4’-甲基-5-苯基恶唑) (POPOP) 0.1 g,二甲苯 600 mL,乙醇 400 mL
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milkdog[使用道具]
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想请问哈:为什么要加入2-deoxy-D-glucose,只加入3H-2-deoxy-D-glucose 不行吗?还有消化细胞加入150ul 0.1N NAOH 其中的N是指多少的量?
  期待你的回答,谢谢!
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xueyouzhang[使用道具]
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消化细胞 每孔加入150 μL 0.1 N NaOH作用两小时,取细胞消化液,加入到闪烁液中,液闪计数。请问0.1 N NaOH是多少啊? N指的单位是什么?恳请赐教
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bling[使用道具]
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2-deoxy-D-glucose在哪有卖,大概多少钱?我也要用这个。哪位战友能不能回答一下,谢谢
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qqq111[使用道具]
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2-deoxy-D-glucose北京原子高科股份有限公司就有卖!电话我给忘了,手机忘没电了。可以给我发信 laoyang0211@126.com 我再告诉你。
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中国同位素公司有卖
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pencil菲[使用道具]
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我也要做氚标记,听说对身体有损伤,想想还没有结婚生子,郁闷啊
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mickeylin[使用道具]
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我也要做氚标记,听说对身体有损伤,想想还没有结婚生子,郁闷啊
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loli[使用道具]
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我也要买氚标记的脱氧葡萄糖,最近打算购买,但是原子高科没有,SIGMA也没有,如果哪位有买的打算可以合买不?或者谁有用剩下的我愿意购买!
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