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标题:[求助]细胞计数时，应该怎样进行稀释？

Ao7[使用道具]
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发表于 2012-6-26 12:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]细胞计数时，应该怎样进行稀释？



我在细胞计数时，总感觉不准。原因主要在于：细胞离心悬浮后，取多少体积的细胞进行计数比较准确？体积大，比较浪费；体积小，肯定不准确。请问大侠，细胞计数时，应该怎样进行稀释？谢谢？
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xingyi08[使用道具]
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发表于 2012-6-26 12:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

离心后，加培养液混匀,吸一定体积(1ml)的进行记数,然后换算你最终想要的体积,最后加培养液分装.
我也是面临这个问题，我觉得应该是这样的，不知道楼主怎么认为
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dragonkilly[使用道具]
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发表于 2012-6-26 12:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

细胞离心悬浮后，取10μl细胞悬液，加10μl的0.4%胎盘兰，再加20μl的培养基，混匀后取10μl上计数盘。4个大方格计数得到的活细胞数直接乘以10的四次方即可。
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发表于 2012-6-26 12:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
细胞离心悬浮后，取10μl细胞悬液，加10μl的0.4%胎盘兰，再加20μl的培养基，混匀后取10μl上计数盘。

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我认为这个稀释方法不准确。一般来说，稀释样品体积越大，结果越准确。“取10μl细胞悬液”能准确吗？
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loli[使用道具]
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发表于 2012-6-26 12:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我觉得主要还是稀释到细胞个数在大格中少一点，不要太多，否则不好算。然后再加培养基调到所需的细胞数。
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pencil菲[使用道具]
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发表于 2012-6-26 12:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

本实验室的方法:细胞离心悬浮后,取100μl细胞悬液，加100μl的PBS,再加200μl的0.4%台盼兰混匀,取7.8μl上记数盘,4个大方格计数得到的活细胞数直接乘以10的四次方。可以试试哦!
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whitesheep[使用道具]
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发表于 2012-6-26 12:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
稀释的程度要控制在每个大方格的细胞数在30个左右. 这个要根据经验,呵呵.
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vivian4123[使用道具]
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发表于 2012-6-26 12:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

  血细胞计数板：将计数板和一张盖玻片擦拭干净，把盖玻片覆在计数板上面，使之稍微移向一侧，露出部分计数板台面，以便滴加细胞悬液。
  染色：取细胞悬液9滴，台盼蓝1滴，混匀。
  加悬液：把计数板平放在显微镜台上，立即从计数板边缘轻轻滴1滴已染色的细胞悬液。
  镜下观察（如图）
  细胞数/ml 原悬液＝4大格细胞总数/4 *10000*稀释倍数
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dongdongqiang[使用道具]
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发表于 2012-6-26 12:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我的做法:
细胞离心混悬后,吸100ul细胞悬液加到一个1.5ml的EP管,加900μl的PBS,配成1000ul,即1ml的细胞悬液,这样是把原细胞悬液稀释了10倍了,再从这个1ml的细胞悬液中用吸管吸一滴从计数板边缘缓慢滴入.
至于后面的如果计算可以参考细胞培养书了呢.
按照这个公式:
细胞悬液细胞数/ml ＝4大格细胞总数/4 *10000
算出来的值要乘上10,是因为在计数前稀释了10倍了
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Ao7[使用道具]
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发表于 2012-6-26 12:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
  血细胞计数板：将计数板和一张盖玻片擦拭干净，把盖玻片覆在计数板上面，使之稍微移向一侧，露出部分计数板台面，以便滴加细胞悬液。
  染色：取细胞悬液9滴，台盼蓝1滴，混匀。
  加悬液：把计数板平放在显微镜台上，立即从计数板边缘轻轻滴1滴已染色的细胞悬液。
  镜下观察（如图）
  细胞数/ml 原悬液＝4大格细胞总数/4 *10000*稀释倍数

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这个我知道！
我的问题是：细胞计数时，应该怎样进行稀释？
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