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标题:[求助]改变培养液中葡萄糖的浓度

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发表于 2012-6-26 16:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]改变培养液中葡萄糖的浓度



我实验需要低糖环境下培养的脐静脉内皮细胞，可是我得的细胞株是在高糖DMEM/10%FBS中培养的，我该怎么办，能否在传代时，直接换成低糖环境下培养，这样对细胞的遗传性状、形态及细胞的生长有没有影响？我最担心这样会改变细胞的遗传性状，导致细胞株的转化。各位高手，帮帮我吧。
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bohe221[使用道具]
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发表于 2012-6-26 16:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

每种细胞都需要有适合自己生长的特定培养条件,但是由于各种原因往往不能达到理想的条件.
针对上述问题,我觉得可以从高糖DMEM/10%FBS培养的细胞中分出一部分,每次传代时将葡萄糖浓度逐渐降低至所需浓度,使细胞有一个适应的过程.如果发现细胞状态不好,再用其它办法.
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发表于 2012-6-26 16:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

据我养脐静脉内皮细胞的经验，高糖直接换成低糖环境下培养，对细胞的形态及细胞的生长是没有什么影响的，只是生长速度稍慢点。至于对他的遗传性状的影响，我认为应该是不可能的
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发表于 2012-6-26 16:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢，我们这儿一个老师也建议我这样做，于是将细胞传到20mmol/L的培养基中，传了两代之后，准备在传到15mmol/L的培养基中，前几天去看细胞，准备传代时，发现细胞生长状态极差，只剩下细胞骨架了（如图）。只好把这瓶细胞扔掉了，不知道是什么原因，是偶然还是必然，请再给点建议。


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发表于 2012-6-26 16:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

再贴一张正常的


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发表于 2012-6-26 16:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

“至于对他的遗传性状的影响，我认为应该是不可能的 ”

“你是说细胞的遗传性状不受影响吗？
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发表于 2012-6-26 16:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

麻烦问一下，你如何更改培养基中的葡萄糖浓度？DMEM培养基不是仅有两种低糖与高糖吗？如是人为在低糖培养基中加葡萄糖，是将葡萄糖粉直接溶解在培养基中，然后过滤吗？如果我需要含不同浓度的葡萄糖干预细胞，应该制备不同浓度的葡萄糖，过滤好后再加入培养基中吗？谢谢了
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发表于 2012-6-26 16:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

根据你所需要的最终葡萄糖的浓度，计算出所需要的葡萄糖量（我用的是粉状的葡萄糖）加入到低糖型DMEM培养液，过滤除菌就可以使用了。
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发表于 2012-6-26 16:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

计算出的所需葡萄糖量包括培养液中的葡萄糖量吗？
另外，如果我设4个葡萄糖浓度梯度，要将4个不同量的葡萄糖量分别加入4个培养基然后分别过滤？
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发表于 2012-6-26 16:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
是啊，要包括培养液中葡萄糖的量，如果你的所需的最高葡萄糖的浓度25mmol/L的话，可以直接用高糖DMEM即可，如果低于这个浓度，那就在低糖DMEM中加葡萄糖，还有一种方法就是高糖DMEM和低糖DMEM按比例混合，可以配置不同的中间浓度的葡萄糖培养基。
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