[求助]流式细胞术测定细胞增殖情况，brdu和PI可以一起做吗？

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标题:[求助]流式细胞术测定细胞增殖情况，brdu和PI可以一起做吗？

tuomu45[使用道具]
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发表于 2012-6-26 16:20 资料个人空间短消息加为好友

小中大

有人做过brdu+PI的流式吗？没做过，真是无从下手阿，在这先谢谢了！

hyuu[使用道具]
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发表于 2012-6-26 16:21 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我看过的文献有这种的方法，但不知道具体如何做。希望园子里有高手的指导。另外建议斑竹能否专门开辟个流式细胞技术专版，便于流式细胞技术理论的交流与提高。有时候流式部分问题过于专业，不好回答。

daod[使用道具]
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发表于 2012-6-26 16:21 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我用CFSE染色方法做细胞增殖，CFSE比brdu更好
不过可能你手头brdu，想做的话
我想这篇文章会对你有所帮助
--流式细胞术检测淋巴细胞增殖方法的建立.

daod[使用道具]
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发表于 2012-6-26 16:22 资料个人空间短消息加为好友

小中大

个人感觉
brdu+PI应该没法做的
brdu在做流式时需用其它荧光素标记，标记过程中要求对细胞进行固定、打孔、再染色
那样的话，后来再用PI染色来区分死活细胞就没意义了

newway[使用道具]
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发表于 2012-6-26 16:26 资料个人空间短消息加为好友

小中大

非常感谢。
可是我觉得，在这用PI应该不是用来区分死活细胞的吧，是分析DNA含量的吧。我想用流式检测细胞增殖，PCNA有谁做过吗？还请多指教啊。

8princess8[使用道具]
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发表于 2012-6-26 16:26 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我也想用BrdU＋PI做流式，也不知道从何做起！有没有高手指点啊？
我用的细胞是一种悬浮细胞：HL-60细胞

fqswdzd[使用道具]
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发表于 2012-6-26 16:26 资料个人空间短消息加为好友

小中大

可以的做双染，结果可以看周期。但是步骤不一样！

1，取细胞，加入1uM BrdU继续培养1h收获。
2，75％冰乙醇固定过夜。
3，PBS洗涤，2M HCL室温30mins。
4，加入FITC－抗BrdU，4°避光孵育30mins。
5，加入10ul PI避光20mins。（含ul/ml PI, 1% Triton-100）
6，上机。

fqswdzd[使用道具]
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发表于 2012-6-26 16:27 资料个人空间短消息加为好友

小中大

应该理解PI的不同作用。有时作为分析周期用，有时作为判断细胞死活用。