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标题:[求助] 微血管内皮细胞纯化讨论

wu11998866[使用道具]
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[求助] 微血管内皮细胞纯化讨论



我培养的是肠微血管内皮细胞,想去掉成纤维细胞。
请问在消化后是内皮细胞先脱壁还是成纤维细胞先脱壁?
另外贴壁时是谁先谁后?请专家赐教!
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KGZ564[使用道具]
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成纤维细胞先脱壁,贴壁时是内皮细胞先
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zranqi_1[使用道具]
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我也在养内皮,每次到了传代的时候都长成成纤维了,很是苦闷,请问楼上一般消化多久成纤维能脱落,你的内皮一般消化多久那
谢谢
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zranqi_1[使用道具]
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还有一个问题想请教,内皮和成纤维一般分别久贴壁?
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yapuyapu[使用道具]
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有人说肝素的作用是抑制成纤维和平滑肌细胞的生长,是否真有此作用。据我所知,肝素的作用似乎是和生长因子起到协同作用,因为很多生长因子是通过肝素作用的。
原代培养内皮细胞似乎就是混杂的问题导致了无法多次传代。我个人认为,通过差速消化和贴壁效果不是很好。
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QUOTE:
原帖由 yapuyapu 于 2012-6-27 18:02 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

有人说肝素的作用是抑制成纤维和平滑肌细胞的生长,是否真有此作用。据我所知,肝素的作用似乎是和生长因子起到协同作用,因为很多生长因子是通过肝素作用的。
原代培养内皮细胞似乎就是混杂的问题导致了无法多次传代。我 ...

完全同意.目前来看,不考虑钱的话,免疫磁珠法是迅速快捷的获得纯化的内皮细胞的最好方法.
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yapuyapu[使用道具]
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我其实就是在用这种方法,但是,即使采用了此方法,仍然在几代后出现混杂,要想得到非常纯的内皮细胞,乃至类似建系,个人认为非常困难。

我觉得要想得到非常纯,多次传代的细胞,采用最原始的刮除法,即sweeping,才是最可能的。但是非常的耗体力和精力。要想得到足够量的细胞,所需时间也要较长。
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yychen[使用道具]
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QUOTE:
原帖由 yapuyapu 于 2012-6-27 18:02 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

我其实就是在用这种方法,但是,即使采用了此方法,仍然在几代后出现混杂,要想得到非常纯的内皮细胞,乃至类似建系,个人认为非常困难。

我觉得要想得到非常纯,多次传代的细胞,采用最原始的刮除法,即sweeping,才是最可能的。但是 ...

我也认为这是一个好办法,即所谓克隆分离法.只要有足够的耐心,绝对可以获得纯化的细胞.最大的好处就是省钱.
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yapuyapu[使用道具]
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要想养好内皮细胞,的确是非常的烧钱。磁珠法的确是一种很好的方法,而且可以反复多次分选,但是仍然不会100%的纯化。多次分选,磁珠的价格也不菲,同样更加耗时耗力。
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summerxx[使用道具]
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养HDMEC蛮长时间,虽然不是肠系膜的血管内皮细胞,但是道理是一样的,谈谈自己的看法。
1. 想利用内皮细胞和成纤维细胞贴壁程度不同来筛选,是不可能的,一般这样传两代以后都是成纤维细胞。
2. 所谓的选择性培养液,我们用过,可以使微血管内皮细胞很好的生长,但是同时成纤维长的同样也很好,因为一般这种培养液都是低血清的(3-4%),同样适合成纤维的生长。
3. 有的战友提出单克隆筛选,想法很好,但是我认为可行性不大,这不是做转染,原代的微血管内皮细胞本来就很娇嫩,而且传不了几代,我觉得是经不起这样“折磨”的。
4. 我们认为目前最好的纯化内皮细胞的方法是磁珠分选,当然这个大家都知道,但是里面还是有很多学问的,包括筛选的时机和次数,我们认为有两个可以选择的方法,一是多次筛选,另外一个是两种不同的磁珠交替筛选,效果都是不错的,我们用CD31多次筛选以及利用CD31和CD105交替筛选效果都还是不错的,但是纯度也就在90%-95%左右,不可能完全纯化。
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