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养HDMEC蛮长时间,虽然不是肠系膜的血管内皮细胞,但是道理是一样的,谈谈自己的看法。
1. 想利用内皮细胞和成纤维细胞贴壁程度不同来筛选,是不可能的,一般这样传两代以后都是成纤维细胞。
2. 所谓的选择性培养液,我们用过,可以使微血管内皮细胞很好的生长,但是同时成纤维长的同样也很好,因为一般这种培养液都是低血清的(3-4%),同样适合成纤维的生长。
3. 有的战友提出单克隆筛选,想法很好,但是我认为可行性不大,这不是做转染,原代的微血管内皮细胞本来就很娇嫩,而且传不了几代,我觉得是经不起这样“折磨”的。
4. 我们认为目前最好的纯化内皮细胞的方法是磁珠分选,当然这个大家都知道,但是里面还是有很多学问的,包括筛选的时机和次数,我们认为有两个可以选择的方法,一是多次筛选,另外一个是两种不同的磁珠交替筛选,效果都是不错的,我们用CD31多次筛选以及利用CD31和CD105交替筛选效果都还是不错的,但是纯度也就在90%-95%左右,不可能完全纯化。