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标题:[分享帖]内皮细胞生长添加剂ECGS以及肝素的作用

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发表于 2012-6-28 12:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[分享帖]内皮细胞生长添加剂ECGS以及肝素的作用



本人在培养微血管内皮细胞，众所周知，微血管内皮细胞的分离，纯化和培养非常困难。而且，要求的条件和资金，财力都比较高。我在这方面进行了一些摸索，大家能不能谈谈各自在培养内皮细胞上，对ECGS和肝素的作用进行一下评价。

我的一点体会：原代时，克隆很小时，需要刺激，而当克隆生长起来，具有较多克隆时，此时即使不添加ECGS，内皮细胞的增殖也很快。

大家有什么经验和体会，欢迎讨论！
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发表于 2012-6-28 12:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

肝素的作用，自认为并非可抑制成纤维细胞和平滑肌细胞的生长，而是由于肝素结合型的生长因子，如ECGF，FGF-1，FGF-2，在肝素存在的情况下可以增加血管内皮细胞的增殖，肝素通过阻止蛋白分解性降解和诱导FGF分子寡聚化来稳定生长因子的活性，从而与FGF受体结合形成二聚体并激活。

也有反面的报道，认为肝素对血管内皮细胞增殖的体外实验显示肝素对EC的增殖没有效果。

也许这些不一致和内皮细胞的来源，培养的条件，以及所使用的肝素的类型和浓度有关。

大家有什么看法，欢迎讨论！
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发表于 2012-6-28 12:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

ECGS是提取自牛脑垂体的包含多种促内皮细胞生长的因子的混合物. 其中主要起作用的是FGF家族，还有一些起辅助作用的激素和其他生长因子. 肝素可以和部分FGF成员结合，起到活化促进作用．在实际操作中，未发现其能对成纤维细胞有抑制作用．
见识粗浅，请高手拍砖.
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发表于 2012-6-28 12:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

没错，ECGS的使用说明书上提到，50到150ug/ml的浓度为推荐浓度，sigma的大多用75，而BD的ECGS一般为100ug/ml，对所用浓度有何看法？

另外，说明书提到，采用150ug/ml的ECGS培养的胎牛心脏内皮细胞和未添加的对照相比，在7天后的增殖比率为5.7比1。大家有没有做过类似的对照试验，我发现，我的细胞在传代后，在保证足够量的情况下，增殖的同样非常快，甚至可以不加。大家有什么看法？
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发表于 2012-6-28 12:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我养的是人的肺动脉平滑肌细胞,消化下来的细胞不多,所以克隆很少. 并且细胞生长很慢.请问可以用ECGS及肝素吗?
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发表于 2012-6-28 12:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我养的是人的肺动脉平滑肌细胞,消化下来的细胞不多,所以克隆很少. 并且细胞生长很慢.请问可以用ECGS及肝素吗?

——————————————————————————————————

老兄，请仔细看贴．上面讨论的是血管内皮细胞，不是血管平滑肌细胞.
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baidukk[使用道具]
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发表于 2012-6-28 12:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

不用ECGS，加谷氨酰胺和肝素，细胞就生长的很好了
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发表于 2012-6-28 12:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
有点感觉是，也许国外公司过分夸大了ECGS的作用，也许在单克隆或者细胞量很少的情况下，ECGS的确有一定作用，但是如果细胞量克隆很多，似乎不用添加同样细胞也可以达到很快的增殖。

国外公司对内皮细胞的培养建立了一整套的方法和培养条件，甚至连消化液，中和液都准备好了。就是说，你如果想养好细胞，就要花银子，按照我的方法来。有点请君入瓮的感觉！

但是，养好内皮细胞真的要这样么？
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shenkunjie[使用道具]
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发表于 2012-6-28 12:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你有没有试过用牛脑垂体提取物？那个比ECGS便宜多了，原料却是一样的

EGM的话promocell的两千左右一瓶，500ml，想买的话pm我，我把代理公司告诉你（不写出来了，免得有作广告之嫌）

clontics的香港有公司有代理，不知进得来不

你如果在广州，我可以送你一点cascade的M200+LSGS,我自己还添加了VEGF的。那个也比ECGS便宜多了，一瓶500ml才1200
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