细胞世界

步骤：
1，酒精察3遍新生大鼠，剪开胸腔，切下左右肺叶。
2，放入PBS中，PBS含50U/ml肝素，反复冲洗。
3，沿肺边缘剪下月1-1.5mm大小肺组织，放入新的PBS中（含肝素），反复冲洗。
4，再剪成1*1*1大小的组织块，放入新的PBS中（含肝素），反复冲洗。
5，把组织块种入培养瓶（前晚用1%明胶铺瓶，用前2hPBS洗一遍，完培洗一遍），加入培养液1.4ml，翻转瓶后放入培养箱。
6，2h翻转瓶，60h区组织块。
7，2天换液一次，每次换1/2。

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1 用平皿或培养板好些，最好是进口原装，可以不用铺明胶;
2 六孔板放10块组织，加液体不超过组织块（大约半ml），组织块不会晃动，每天换液，2d可以牢固贴壁，再加入足量液体. 这种方法，成功率较培养瓶翻转法要高.
3 60h去组织块，仍难以保证没有成纤维爬出.
4 你的培养基不合适，很难成功. 应该用微血管专用培养基.

谢谢指导。正如你说的，我去处组织块后，大多数情况下有很多杂细胞，有人说，我的M199不适合养原代，可我早已配好了。等用完了在改为DMEM，文章上用的最多的是DMEM，我认识几个养肺微血管的，他们用的都是DMEM，他们说养的挺好。我也买了DMEM，等血清来了就配上。
你说的很难成功是指什么，有太多杂细胞还是细胞长不出来，还是细胞长不好？
微血管专用培养基是什么，哪里有卖，多少钱，是否可以抑制成纤维细胞的生长？
还有一个问题，我的组织块通常是先长出成纤维细胞，在长出内皮细胞（从形态学上看得，还没做鉴定）。
因为细胞一直不爬玻片，所以没法做鉴定，请问了一个专门做鉴定的老师，他叫我用鼠尾胶处理后再爬片，下次准备这样做。还想问一下你们怎样让内皮细胞爬玻片的？

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1 M199可以养内皮细胞，不过要加内皮细胞生长因子（ECGF，很多公司有售）．DMEM根本不能养内皮细胞，你认识的那几个人胡说呐，M199不行的话，DMEM更不可能. 也有微血管专用培养基，但是太贵;
2 60h内应该是内皮爬的快. 看来你操作有问题. 试试我前面说的组织块法.
3 细胞传代后爬玻片没问题，不用铺胶.
4 你的那个培养基可以在试试，肝素降为10ug/ml．最好加上ECGF或bFGF.

谢谢你的指教

国内大多数文章都用ＤＭＥＭ，我现在糊涂了。
还有肝素为什么１０ｕ／ｍｌ更好呢？我是看人家文章上用的９０ｕ／ｍｌ。

今晚我试试培养板６孔。谢谢你。

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尽信书不如无书.
国内大多数文章和国外小部分文章都不可信.
要是DMEM可以的话，国外大公司化那么大力气开发专用培养基干吗？钱多没处化吗?