[求助]脐静脉内皮细胞

细胞世界 » 讨论区 » 经验共享 » [求助]脐静脉内皮细胞

15 1/2 1 2 ››

需要登录并加入本群才可以回复和发新贴

打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:[求助]脐静脉内皮细胞

avi317[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 74131
精华 0
积分 566
帖子 811
信誉分 100
可用分 4896
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-6
状态离线

发表于 2012-6-30 12:19 资料个人空间短消息加为好友

小中大

养内皮细胞有快两个月了，失败了很多次，最先是用的小牛血清+1640，始终不贴壁，换成20%胎牛血清后立竿见影地贴壁并且原代和第一代生长得很好，但是到了第二代生长就明显减慢了，昨天种板后发现第三代将近有一半的细胞没有贴壁，估计没有希望了。请教几个问题：
1.ECGF是不是就是VEGF阿？一般培养基的终浓度是多少呢？大概是多大的包装呢？我看见有1克5万多块钱的，太恐怖了。
2.我看见有的培养基里加的肝素，是起什么作用呢？由于我最后要做凝血方面的测试，怕有影响，所以没有加肝素，有没有影响呢？
3.种到24孔板以后发现很多细胞就一堆堆地集中在孔的中心部位，这个是好事还是坏事呢？个人认为集中在一起比较有利于细胞的旁分泌，但是堆在一起的话会不会影响铁壁呢？还有就是为了节约培养基我只加了0.5ml/孔，量少不少呢？我觉得液体的深度还是基本上够了的。
4.如果我用第2代的细胞进行实验可以不呢？其他细胞的混杂应该不明显了吧？

DDD[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 73222
精华 1
积分 587
帖子 790
信誉分 102
可用分 4768
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-9-20
状态离线

发表于 2012-6-30 12:20 资料个人空间短消息加为好友

小中大

楼主，你好，我也是做HUVEC原代培养的，愿意和你分享！

1.二者都是内皮细胞生长因子。VEGF一般都是体外重组的，ECGF是比较纯的牛下丘脑组织提取物粉末，二者都可以用。我用的是VEGF,终浓度是20ng/ml，买的2ug，700元，还没等我的细胞养完就用完了，真是烧钱阿！

2. 肝素可以抑制平滑肌细胞及成纤维细胞的生长

3.堆在一起的话不利于细胞生长。举个简单的例子，我们为什么要传代，就是因为空间太小，细胞挤在一起不利于营养的吸收，同样的道理，不用我细说了吧

4.不知你的细胞纯度怎样，我的原代里混了很多成纤维细胞，传一般传2～3代才会少些，楼主如果想试着用第二代也可以，做个8因子鉴定下纯度就可以了。

祝实验顺利！

avi317[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 74131
精华 0
积分 566
帖子 811
信誉分 100
可用分 4896
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-6
状态离线

发表于 2012-6-30 12:21 资料个人空间短消息加为好友

小中大

好的，谢谢了，真是经验之谈阿！还有个疑问，就是说用肝素会不会影响测量凝血指标呢？？虽然后面用PBS冲洗会不会有残留呢？我之所以没有用就是因为考虑这一点。
还有就是我感觉单从形态学上很难分辨成纤维细胞和内皮细胞阿，没有经验觉得所有的贴壁细胞都是一个样子的，难到就只能用免疫组化了？

hyuu[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 79232
精华 1
积分 626
帖子 847
信誉分 102
可用分 5149
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-12-8
状态离线

发表于 2012-6-30 12:21 资料个人空间短消息加为好友

小中大

不用生长因子如何？试试

star#room[使用道具]
三级
Rank: 3