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标题:[求助]关于mtt

newway[使用道具]
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发表于 2012-7-2 17:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]关于mtt



我做一种药物对大肠癌细胞的是否有作用，先用mtt检测一下。由于是新手，也没人指导。现说说我的mtt步骤，让大家看看是不是明显不对：
昨天拿了二块96孔培养板，一块培养板的96个孔全部接种细胞，另外一块培养板的96孔全部只加培养液，今天用培养液稀释药物到1mg/l后，在接种细胞的那块培养板的96个孔里面每孔都加10ul药物，而在另外一块培养板的96孔里面每孔中加了10ul的培养液。

今天仔细看看书，好像有很大的出入，在此请教一问题，是不是只用一块板就可以了，只是部分孔用于设对照，而不是另外拿一块板作为对照，看样子我做的大有出入，出笑话了！

谢谢给予解答
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utt0989[使用道具]
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发表于 2012-7-2 17:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我没看懂你实验；
１你的药物就一个浓度，而且都上在同一块培养板的96个孔全部接种细胞
那你得到９６个重复孔，要怎么多干吗呢，一般平行孔做到３－６个就可以了，你干吗做９６个平行孔呢？
２对照干吗要用另一块板子呢，可以在同一块上留出几个孔做对照呀．空板子也有吸光值，不同的板子也不一样．所以最好在同一块板子上做对照．

建议：
药物设置不同的浓度，每个浓度做３－６个平行，在同一块板子上，要设阴性对照，空白对照．
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发表于 2012-7-2 17:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

再次请教，这样设计有没有问题？谢谢！

第一排6个孔加0.5mg/l药物，3个孔作为空白对照，三个孔作为阳性对照


第二排6个孔加1mg/l药物，3个孔作为空白对照，三个孔作为阳性对照


第三排6个孔加2mg/l药物，3个孔作为空白对照，三个孔作为阳性对照

第四排6个孔加3mg/l药物，3个孔作为空白对照，三个孔作为阳性对照


第五排6个孔加5mg/l药物，3个孔作为空白对照，三个孔作为阳性对照


第六排6个孔加10mg/l药物，3个孔作为空白对照，三个孔作为阳性对照


第七排6个孔加15mg/l药物，3个孔作为空白对照，三个孔作为阳性对照

第八排6个孔加20mg/l药物，3个孔作为空白对照，三个孔作为阳性对照
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mamamiya[使用道具]
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发表于 2012-7-2 17:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

另外问一下，如果我不想做3mg/l这个药物浓度，是不是可以只做7排？
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mamamiya[使用道具]
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发表于 2012-7-2 17:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

A1作为空白
B1——H1及A12——H12只加培养液，以除掉边缘效应
A3——H3，A4——H4，A2——H2作为对照
A5——H5，A6——H6，A7——H7，A8——H8，A9——H9，A10——H10，A11——A11分别加不同浓度的药物

这样如何？
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newway[使用道具]
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发表于 2012-7-2 17:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
有点浪费扳子．
你可以这样：
　　　　　板子边上四周的３６个空只加培养液，是为了消除边缘效应，不做实验孔用，同时可以用来做空白对照．有３孔做空白对照就够了．阳性对照孔多了，没有阴性对照空．

Ｂ2——Ｇ2，Ｂ3——ＧH3，Ｂ4——Ｇ4，Ｂ5——Ｇ5，Ｂ6——Ｇ6，Ｂ7——Ｇ7，Ｂ8——Ｇ8，Ｂ9——Ｇ9，作为加药孔
Ｂ10——Ｇ10，为阳性对照控
Ｂ11——Ｇ11，为阴性对照空
空白对照，就用边缘孔来做也没关系．
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 小中大
实验时不是应该要设设置调零孔，对照孔，加药孔。
调零孔加培养基、MTT、二甲基亚砜。
对照孔和加药孔都要加细胞、培养液、MTT、二甲基亚砜，不同的是对照加溶解药物的介质，而加药组加入不同浓度的药物。
我溶解药物的介质就是培养基，你说对照还要分阳性对照和阴性对照，这二者有何区别？
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发表于 2012-7-2 17:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

按照我的试验周边孔作为调零孔。Ｂ2——Ｇ2，Ｂ3——ＧH3，Ｂ4——Ｇ4，Ｂ5——Ｇ5，Ｂ6——Ｇ6，Ｂ7——Ｇ7，Ｂ8——Ｇ8，Ｂ9——Ｇ9，作为加不同浓度药物的加药孔
。Ｂ11——Ｇ11作为只加细胞不加药物的阴性对照孔。
那你所说的Ｂ10——Ｇ10作为阳性对照孔，加什么东西？
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mamamiya[使用道具]
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发表于 2012-7-2 17:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

是不是你说的阳性孔加入一种对肿瘤有确切作用的药物？以作为和试验药物的比较？是这样的吗
比如说，我做A这种药物对大肠癌细胞的影响，加药孔加入A这种药物，而阳性对照孔加入奥沙利铂这种药物，就是说过如果奥沙利铂在本实验中没表现出抑制肿瘤细胞，说明操作有问题，则本实验无任何意义。是这样的吗？
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newway[使用道具]
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发表于 2012-7-2 17:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我说的空白孔，也就是调零孔：培养基、MTT、
　　　　阴性对照：细胞，培养基，MTT、
　　　　阳性对照：细胞．培养基，一般用已知对细胞有强抑制作用的物质，MTT
　　　　样品孔：细胞，培养基，药物，MTT
　二甲基亚砜是弃培养液后，溶解ＭＴＴ沉淀时加的，当然调零孔，阴性对照，阳性对照，样品孔都要加呀
阴性对照，用来求药物的ＩＣ５０．抑制率等是用．阳性对照就是你说的检察实验的问题．
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