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标题:[求助]关于细胞爬片

qqq111[使用道具]
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发表于 2012-7-3 09:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]关于细胞爬片


各位大虾 我最近在做细胞爬片 24孔板里每孔细胞数约为5*10^ 4个
已经爬了好几次了 可是每次总是大多数的细胞聚集在玻片的中心、堆叠 还有些在靠近周边的地方 中间的部分总是会空出来 不生长细胞 这是怎么回事？如何解决吗？ 怎样才能让细胞在玻片上长的很均匀？
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shenkunjie[使用道具]
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发表于 2012-7-3 09:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我也是这个问题阿，每次细胞都是在片的周围铁壁生长，中间就是没有，难道与液体的张力作用有关吗？
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HPLC使者[使用道具]
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发表于 2012-7-3 09:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
细胞爬片的制作有个小窍门：其实我们每次在做之前先把爬片处理好，主要是过酸漂洗高压烤干。然后用无菌的镊子把爬片放在12孔或6孔或24孔板中，讲细胞消化清洗两遍后用培养液重悬，密度在5×105/5ml（个大的细胞）5×106/5ml（个小的细胞）然后将培养液轻轻的滴在爬片上，切记爬片和孔板一定要干燥，这样在爬片上由于表面张力就会形成一个拱起来的细胞滴，不要晃动板子，放在孵箱里1h后取出，补全培养液，ok你的爬片就做成了，你会发现细胞全部集中在爬片中部而不是边缘了。顺便解答一下楼上的问题：只要你的容器是孔板或者培养皿，细胞都是优先往边上爬。个人愚见，祝实验顺利！
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qqq111[使用道具]
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发表于 2012-7-3 09:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我作爬片之后 要做免疫组化 但是我的细胞在中间堆叠的很严重 这样染出来的片子效果很不好 有没有什么方法 能够让细胞爬的时候 均匀点？ 谢谢！！
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HPLC使者[使用道具]
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 小中大

如果是作组化的话就一定不能让细胞覆层化。最好是每2个细胞之间有三分之一个细胞的距离。做法也很简单：爬片的时候调整细胞浓度稀一些，让细胞刚种上的时候密度大概在20％左右。等到长约60％的时候就可以固定了。这个过程一般在2－3天，如果细胞长的很快则需要天天观察，不要让其长过头了。个人愚见，祝实验顺利！
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发表于 2012-7-3 09:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我第一次爬片的时候，用的是24孔板，结果也是一样，很多细胞都堆到中间，而周边没什么细胞。最后以失败告终。而且24孔板里放玻片，即不好放，也不好取。所以后来我改成用35mm的培养皿爬，效果不错，细胞很均匀，不是太密，也不是太稀，还有，今天组化的结果也不错，心情很是开心呀！祝大家都实验顺利！
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orangecake[使用道具]
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发表于 2012-7-3 09:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我以前是先泡酸处理,然后再经过酒精浸泡,取出再在超净台下吹干,再高压.效果还可以.现在用的是买莱卡公司显微镜送的片子,高压一下就用,效果非常的好!
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gemei0115[使用道具]
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发表于 2012-7-3 09:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
有一个很菜的问题：
直接在96或24孔板中培养的细胞不行吗？用玻璃片做有什么优点？
我用96孔板做细胞的免疫荧光观察觉得也不错啊？
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qqq111[使用道具]
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发表于 2012-7-3 09:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

还有一个问题：
我以前做的爬片失败了 我的小圆玻片可以再消毒用吗？

如果可以的话 应该怎样消毒处理？
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8princess8[使用道具]
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发表于 2012-7-3 09:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请教楼主，你做爬片的小圆玻片在哪里买的？
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