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标题:[求助]细胞帖壁不长的原因是什么？

jkobn[使用道具]
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发表于 2012-7-3 11:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]细胞帖壁不长的原因是什么？


大家好，我培养的是hep-2细胞，最近一段时间我的细胞一直出现下边的问题，请大家帮我分析分析这是什么原因造成的阿，谢谢大家了！
1、我培养的细胞在传代后第一天，细胞形态很好，贴壁率也不错，但是第二天细胞就不再有增加的趋势，反倒是贴壁的细胞越来越少，变圆的细胞越来越多。（变圆的细胞有点大，长在已经贴壁的细胞上边。）
2、我在园子里一直听见有消化过度的说法，到底什么样叫消化过度阿？
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windy+++[使用道具]
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发表于 2012-7-3 11:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
1.
变圆的细胞越来越多。（变圆的细胞有点大，长在已经贴壁的细胞上边。）
你的细胞重叠再一起了.这个位置应该有很多细胞,你应该马上将其重新消化,吹匀,一般这种情况对细胞状态影响很大.
这种情况多半是因为你没有把细胞吹散,建议你消化前用pbs洗一下,效果还可以的
2.
我的理解是细胞稍微变形,晃动瓶子可以看见有少许细胞脱落为消化合适
消化过度可以看见细胞自行脱落(大片)传代后有时可以看到细胞残片
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jkobn[使用道具]
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发表于 2012-7-3 11:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢windy+++的答复，可是我感觉变圆的细胞好像是死细胞，不过是还没有漂起来的死细胞，因为我感觉贴壁的细胞越来越少。而且我的细胞长得也不是很密，没有重叠起来。不知道到底是什么原因导致细胞贴了又死了.这种贴了壁不长，反而死的细胞还有救吗？请路过的大虾帮忙分析一下。谢谢各位了。
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3648755[使用道具]
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发表于 2012-7-3 11:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
大家好，我培养的是hep-2细胞，最近一段时间我的细胞一直出现下边的问题，请大家帮我分析分析这是什么原因造成的阿，谢谢大家了！
1、我培养的细胞在传代后第一天，细胞形态很好，贴壁率也不错，但是第二天细胞就不再有增加的趋势，反倒是贴壁的细胞越来越少，变圆的细胞越来越多。（变圆的细胞有点大，长在已经贴壁的细胞上边。）
2、我在园子里一直听见有消化过度的说法，到底什么样叫消化过度阿？

————————————————————————————————

" 我培养的细胞在传代后第一天，细胞形态很好，贴壁率也不错"
我认为消化应没问题，
“但是第二天细胞就不再有增加的趋势，”
应考虑一下你的培养基，血清，L-GLUTAMINE等
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yapuyapu[使用道具]
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发表于 2012-7-3 11:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

消化过度我的理解是消化液加进去后,时间偏长,消化久了细胞就出现絮絮了,我们养的是巨噬细胞，也属于贴壁细胞,就是这个情况,我们的处理方法就是:先用无小牛的培养液或PBS洗一下,再有就是胰酶要预热,因为酶的作用影响因素有很多,其中包括温度,时间,还有作用的量以及PH值,你可以酌情考虑一下，希望对你有所帮助.
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发表于 2012-7-3 11:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

细胞是否发黑?
有的细胞可能由于物理作用黏附在一起,在世细胞发暗,如果细胞透射度好,应该不是死细胞
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jkobn[使用道具]
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发表于 2012-7-3 11:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我的细胞并没有变黑，但是我感觉细胞形态是越来越不好，感觉细胞越来越没有立体感，细胞有点发散就好像要破的感觉。贴壁的细胞也是一天比一天少，观察的时候上边漂了许多像细胞碎片的东西，用肉眼观察培养液好像里面有很多类似水垢似的东西。不知道这是不是污染了呢？
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发表于 2012-7-3 11:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你养的是不是肝癌的hepG-2细胞啊？这个细胞我养过，比较难养．上述的情况我也出现过，我觉得不是污染，而是死细胞太多了．我的建议有两点：１　赶紧把细胞传代，传代后不要扩，而是２瓶传１瓶或者是从瓶里传到孔里．因为细胞生长也有依赖性，密度高了，容易存活生长；２　　细胞传代时不要用胰酶消化，我通常的做法是直接吹打，hepG-2贴壁不牢，很容易吹成单细胞
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发表于 2012-7-3 11:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
同意楼上的。
细胞死亡的因素很多，是否死亡、污染做个染色鉴定一下就清楚了．
用六孔板试试看，吹细胞时动作一定要轻缓，不要吹出很多泡，因为泡泡的破裂同样损伤细胞．
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yapuyapu[使用道具]
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 小中大

盖子盖的太紧了？CO2进不去？
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