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标题:[求助]请大家帮我看看这是ＤＣ吗？

阿k[使用道具]
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发表于 2012-7-6 12:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]请大家帮我看看这是ＤＣ吗？



大家好，这是我和４３２８５６３７等第一次培养出来的小鼠骨髓来源的ＤＣ，请帮忙看看这是否ＤＣ好吗？虽然形态和资料上描叙的很相似，但还是不确定，请大家帮忙鉴定一下，谢谢拉

树突状细胞DCs
1.细胞来源：小鼠骨髓细胞；
2.培养天数：3d;细胞倍增时间--24h左右；
3.放大倍数：倒置显微镜，10*40倍；
4.培养基：RPMI1640+10%FBS ＋GM-CSF（５ng/ml）＋IL-4（５ng/ml）
5.细胞状态与特征简述:细胞有针状突起，呈放射状；


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pengke1983[使用道具]
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发表于 2012-7-6 12:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
如果是DCs應該不會proliferation
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发表于 2012-7-6 12:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

按形态鉴定DC不可靠，（1）培养至7d，再看；（2）表面分子鉴定。
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jrwyyplt[使用道具]
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发表于 2012-7-6 12:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
在小鼠骨髓DC培养的时候瓶底可以见到有贴壁的类似成纤维细胞的生长

在这个图里面没有看到，

从图中的细胞来看，如果你确实是在DC培养瓶里面照的照片

那么那两个有突起的细胞应该是DC，你可以动态观察一下突起长度

在逐渐成熟的过程中细胞突起会变长

作DC鉴定的时候楼主可以考虑一下几个方面：

1.普通光镜下观察，成熟DC可以见到很明显的树枝样突起，

2.可以考虑作电镜观察，扫描电镜和透射电镜

3.流试细胞测共刺激分子，一级I类分子和II类分子；在成熟过程中那些都是

要上调的，

祝你实验顺利
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阿k[使用道具]
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发表于 2012-7-6 12:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我们只是通过贴壁法来纯化,细胞很多很杂,类似于成纤维细胞的细胞肯定是有的,我晚些再贴几张照片上来,请大家帮忙分析鉴别,谢谢各位拉
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发表于 2012-7-6 12:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

这是7d后的. 处理方法:贴壁2h后,将上清液转至另一培养瓶中,第5d取悬浮细胞再培养2天. 本来是打算贴壁2h后弃悬浮细胞以除粒细胞的,担心DC损失大,所以将预备丢弃的细胞也进行了培养,结果居然好象就这瓶长得最好,简直想晕!


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发表于 2012-7-6 12:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

7d后的 哪些是DC?


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 小中大

7d后的 细胞数量很少
处理方法:贴壁2h后,弃上清,添加1640完全培养基(GM-CSF IL-4 均为5ng/ml R&D公司),第5d取悬浮细胞再培养2天.


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 小中大
7d后的
处理方法:贴壁2天后,弃上清,添加1640完全培养基(GM-CSF IL-4 均为5ng/ml R&D公司),第5d取悬浮细胞再培养2天.
感觉比贴壁2h后得的悬浮细胞再培养的那张差点,但比贴壁2h后弃悬浮细胞后再培养的那张又好一点


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 小中大

关于贴壁法纯化,看过很多文献与资料,打算先弃悬浮细胞以除粒细胞(有的说2~3h,有的说第2天,还有的说第3天),再弃贴壁细胞以除巨噬细胞(第5天左右).我原本是更倾向于2~3h后弃悬浮细胞的,因为有资料上说DC2~3h后贴壁,18h后开始悬浮,这次我各种情况都同时培养了一瓶,结果居然完全出乎我的意料!
也许因为这是我第一次做,有的操作方面做得不是很好,影响了结果吧.再者,拍照时同一瓶中不同视野的图片不一样,我每瓶都只挑了一两个视野,不具代表性不是很能说明问题吧.只能这样解释了
总之这次的摸索结果让我反而不知道该任何通过贴壁法来纯化了,请大家帮忙支支招吧!
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