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标题:[求助]细胞骨架免疫荧光

superboy[使用道具]
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发表于 2012-7-6 12:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]细胞骨架免疫荧光


之前也看到类似的帖子，我的实验中也出现的同样的情况：
我做的是细胞骨架的荧光染色，染出来的效果是点状的荧光，可是理论上应是像肌丝状的荧光图，我处理细胞的温度是4度，或置于冰上处理
请了解情况的战友帮我分析一下如何解决这个问题！
谢谢！
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ququer787[使用道具]
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发表于 2012-7-6 12:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

可以啊,
你做出来的结果怎么样呢?
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ququer787[使用道具]
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发表于 2012-7-6 12:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你做的是什么细胞骨架的荧光染色呀？我也是做细胞骨架的，染出来的确实是丝状的结构，我没有用4度过夜，我用的是37度40分钟，效果很好‘，有机会讨论一下吧。
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superboy[使用道具]
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发表于 2012-7-6 12:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我做的是微管蛋白的荧光染色
用的一抗是β-tubulin,FITC的二抗
我用的是多聚甲醛的4度固定,后面的洗的步骤很多都是冰上处理的细胞
不知道这样是否有问题呢?
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bluelake[使用道具]
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发表于 2012-7-6 12:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

PFA在常温下固定细胞就可以了。
洗也在常温下，没有必要在冰上处理。
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ritou1985[使用道具]
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发表于 2012-7-6 12:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我做的是支持细胞的骨架
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superboy[使用道具]
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发表于 2012-7-6 12:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你好,请问你做的是ACTIN吗
用的是什么样的抗体呢
我觉得这个和一抗有很大的关系
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superboy[使用道具]
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发表于 2012-7-6 12:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我做tubulin荧光染色的图片，可是我想出来的效果图应是丝状的
固定和透化应该都是没有什么问题了的
表达也是有的
可是形态就是出不来啊！

做出来的战友们可否给点指示！
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发表于 2012-7-6 12:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我感觉可能在于以下的原因：
1：你的抗体有问题
2：你的染色方案有问题，或者细胞本身受了一些药物的影响，从而导致微管的去聚化，染色后看起来就是整个细胞浆的染色。
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superboy[使用道具]
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发表于 2012-7-6 12:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
非常感谢楼上的意见

我的细胞是没有加药物处理过的
想知道除了抗体的原因外,如果是方法存在问题,战友有更好的方法吗?
现在急需可行的方法解决现在的问题!
谢谢
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