细胞世界 » 讨论区 » 经验共享 » [求助]都是滤器惹的祸

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 27  1/3 123››
 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:[求助]都是滤器惹的祸

ritou1985[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77664
精华 0
积分 644
帖子 948
信誉分 100
可用分 5596
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-19
状态 离线
1

发表于 2012-7-7 16:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]都是滤器惹的祸



今天配了一升培养液，用圆筒滤器过滤除菌时，滤膜破了，负压很大，全喷出来了，那叫一个狼狈呀，台面上，地上，全身都是。液体也浪费了，瓶子也白洗了，环境还污染了。郁闷哪。光是收拾残局就花了三个多小时，生怕擦得不干净会孳生细菌。
上次配药时也出现过这种情况，不过只有100ml, 伤亡没有这么惨重，只是台面上洒了，而且是滤了一大半才破的。今天倒好，刚流了一会儿就喷了。
我用了双层滤膜。0.22um，为什么总要破呢？已经有心理障碍了。
有人不幸有过同样的经历吗？
请多指点，不想再吃同样的亏了。
顶部
IAM007[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 75217
精华 0
积分 464
帖子 608
信誉分 100
可用分 3861
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-20
状态 离线
2

发表于 2012-7-7 17:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

防细菌滤膜的网孔的直径为0.45微米以下，当溶液通过滤液后，细菌的细胞和真菌的孢子等因大于滤膜直径而被阻，在需要过滤灭菌的液体量大时，常使用抽滤装置；液量小时，可用注射器。使用前对其高压灭菌，将滤膜装在注射器的靠针管处，将待过滤的液体装入注射器，推压注射器活塞杆，溶液压出滤膜，从针管压出的溶液就是无菌溶液。
过滤除菌操作步骤：首先将过滤器、接液瓶用纸包好，滤膜可放在培养皿内用纸包好。使用前先经121℃高压蒸汽灭菌30分钟；在超净工作台上，将滤器装置装好，用灭菌无齿镊子将滤膜安放在隔板上，滤膜粗糙面向上；然后将待除菌的液体注入滤器内，开动真空泵即可过滤除菌。滤液经培养证明无菌生长后可保存备用。

一定要采用质量好的膜，滤纸一定要安装平整，滤纸四周受的张力要均匀，不能有褶皱，你可以一次过滤500ml，免得压力太大，同时负压吸力不要开太大，我以前用的是象呼吸科用的呼吸器，手工挤压
顶部
one[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 73393
精华 0
积分 697
帖子 1114
信誉分 100
可用分 6353
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-9-22
状态 离线
3

发表于 2012-7-7 17:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我不用双层滤膜的，因为我发现滤得好慢，但没出现楼主的这种情况，可能是你的真空泵产生的负压太大了吧

SO，至多0.45＋0.22um，一般就一张0.22um的滤膜

没见一张滤膜 滤 1 L出现污染的情况
顶部
junjie05[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 79902
精华 0
积分 450
帖子 560
信誉分 100
可用分 3646
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-17
状态 离线
4

发表于 2012-7-7 17:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

楼主滤膜是怎么放置的？光面应该朝液体流入的方向吧。滤膜不要重复用。
顶部
viviwang1987[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 77490
精华 0
积分 458
帖子 636
信誉分 100
可用分 3953
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-17
状态 离线
5

发表于 2012-7-7 17:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我一般也是放两层滤膜，而且还要在两边加放两层滤纸。我们一般把压力泵的压力调到0pa,压紧上端的滤口流速还是不算慢的。
我只遇到过一次破膜，那是第一次滤，没经验，犯了一个相当低级的错误，消毒好滤器放在60度烤箱里烘干，结果------。我相信楼主应该不会犯这样的错误，呵呵。
顶部
misswu61[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 79547
精华 0
积分 747
帖子 774
信誉分 100
可用分 4691
专家分 100
阅读权限 255
注册 2011-12-13
状态 离线
6

发表于 2012-7-7 17:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

滤膜没有放反，没有重复使用，没有烘干，上海实生买的，应该不差
真空泵的压力好像没法调，我用的是像小水泵那么大小的真空泵，没有找到可以调节的旋钮。怕负压太大，我是将开关按下，约3至5秒赶紧关掉，让液体惯性往下流，待不太滴了再把开关打开，很小心翼翼地，还是破了。注射器推得很费力，实在推不动。
看来下次我也去弄个手工挤压的，安全，慢就慢点吧。
如果还有一种解释的话，那就是：见鬼了
谢谢大家的宝贵建议，希望下次不会在破了。我有过成功经历的
顶部
misswu61[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 79547
精华 0
积分 747
帖子 774
信誉分 100
可用分 4691
专家分 100
阅读权限 255
注册 2011-12-13
状态 离线
7

发表于 2012-7-7 17:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

实在不行，用一次性的滤器吧，滤的多时很方便的省事
顶部
ladyhuahua[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76658
精华 0
积分 984
帖子 1667
信誉分 100
可用分 9116
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-8
状态 离线
8

发表于 2012-7-7 17:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我最近配液时也出现过液体流速太快的情况，结果浪费了好多液，不过后来调节速度给控制住了。
对了，滤膜是光面向上还是向下？楼上有人说粗糙面向上，可我的是光面向上。请教各位！
顶部
baidukk[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77444
精华 0
积分 803
帖子 1226
信誉分 100
可用分 7048
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-17
状态 离线
9

发表于 2012-7-7 17:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

还是换个另外种滤器，全封闭的，即使漏了也不会喷不来。
顶部
HPLC使者[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 76541
精华 0
积分 250
帖子 260
信誉分 100
可用分 2011
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-7
状态 离线
10

发表于 2012-7-7 17:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我一般也是放两层滤膜，而且还要在两边加放两层滤纸。我们一般把压力泵的压力调到0pa,压紧上端的滤口流速还是不算慢的。
我只遇到过一次破膜，那是第一次滤，没经验，犯了一个相当低级的错误，消毒好滤器放在60度烤箱里烘干，结果------。我相信楼主应该不会犯这样的错误，呵呵。

————————————————————————————————————

我怀疑这跟 滤膜本身有关系，因为我每次都是60度烘干的，从未破过。
顶部
 27  1/3 123››