[求助]关于细胞培养

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标题:[求助]关于细胞培养

okhaha[使用道具]
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发表于 2012-7-9 16:38 资料个人空间短消息加为好友

小中大

上周五从外地拿回了一株大肠癌细胞株（用DMEM培养的），经过颠簸，细胞变得不贴壁，放在培养箱培养了一夜，均贴壁了，而且细胞较多，基本长满，遂于周六予以以1640培养液进行换液，周日细胞也生长良好，遂予以以0.25％的胰酶400ul进行消化（50ml的塑料培养瓶），予以1：2进行分瓶培养，周一那天发现很多细胞没有贴壁，有少数贴壁，而且细胞仍然呈圆形，遂予以以1640培养液进行换液，换液后观察细胞发现，细胞均呈圆形，虽然细胞靠壁，但均晃来晃去。这种情况下，细胞能存活下来吗？

谢谢！

大尾巴[使用道具]
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发表于 2012-7-9 16:38 资料个人空间短消息加为好友

小中大

可能消化过了.不贴壁或者贴了不长都基本没有办法了.我有一次也是晃了,但是有少量贴壁,后来慢慢长起来了,但是消化没有注意,时间稍微长了点,又死了很多,出现这种情况.但我养的不是这种细胞.有的细胞很娇,消化长了就死了.

okhaha[使用道具]
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发表于 2012-7-9 16:38 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 大尾巴 于 2012-7-9 16:38 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

可能消化过了.不贴壁或者贴了不长都基本没有办法了.我有一次也是晃了,但是有少量贴壁,后来慢慢长起来了,但是消化没有注意,时间稍微长了点,又死了很多,出现这种情况.但我养的不是这种细胞.有的细胞很娇,消化长了就死 ...

400ul的消化液应该不多的吧
我也有少量贴壁，但愿能长起来！

TAT[使用道具]
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发表于 2012-7-9 16:39 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我也准备作培养，请教楼主：
1.你从外地拿细胞株回来过程中，对细胞有没保护措施（低温？常温？）；
2.“予以1：2进行分瓶培养”是什么意思？是不是塑料培养瓶细胞长满后分两个培养瓶装？

zzzz[使用道具]
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发表于 2012-7-9 16:44 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我也发现类似情况了，也是肿瘤细胞，有好多圆形不贴壁细胞，我觉得可能是从一次性塑料培养瓶换瓶后对细胞生长会有一定影响，细胞可能由于刚复苏出来比较脆弱，或是由于变换培养基后生长环境会受到影响，胰酶的浓度和消化时间也会有影响。

okhaha[使用道具]
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发表于 2012-7-9 16:45 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我也准备作培养，请教楼主：
1.你从外地拿细胞株回来过程中，对细胞有没保护措施（低温？常温？）；
2.“予以1：2进行分瓶培养”是什么意思？是不是塑料培养瓶细胞长满后分两个培养瓶装？

——————————————————————————————

培养瓶贴身带回来的
一瓶细胞分成二瓶养的，是塑料培养瓶长满后分成二瓶的

okhaha[使用道具]
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发表于 2012-7-9 16:45 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我也发现类似情况了，也是肿瘤细胞，有好多圆形不贴壁细胞，我觉得可能是从一次性塑料培养瓶换瓶后对细胞生长会有一定影响，细胞可能由于刚复苏出来比较脆弱，或是由于变换培养基后生长环境会受到影响，胰酶的浓度和消化时间也会有影响。

————————————————————

我觉得可能是刚刚复苏比较脆弱
周四复苏，我周五带回来的

okhaha[使用道具]
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发表于 2012-7-9 16:46 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我也发现类似情况了，也是肿瘤细胞，有好多圆形不贴壁细胞，我觉得可能是从一次性塑料培养瓶换瓶后对细胞生长会有一定影响，细胞可能由于刚复苏出来比较脆弱，或是由于变换培养基后生长环境会受到影响，胰酶的浓度和消化时间也会有影响。

———————————————————————————

仅有的几个贴壁较牢的，也不知道能不能生存下去的

hold住[使用道具]
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发表于 2012-7-9 16:46 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我分析可能是一下问题：（1）运输过程中对细胞的损伤，比如：过度振荡（以后运输把培养液最好注满整个培养瓶）、产生较多气泡（气泡的张力过大，会引起细胞膜破裂而死掉）等等；（2）细胞消化过程的一些细节问题，比如：消化用的时间（时间长，会引起细胞损伤）、消化过程的温度（最好在37度条件下，消化液也是预温到37度）、消化吹打造成的机械损伤（操作要轻柔、熟练、气泡越少越好）；（3）不知道你用的培养瓶是不是一次性的，因为玻璃的经常见消化传代后贴壁不好的情况；（4）跟细胞本身的特性也有关系，如果是细胞本身特性问题，最好通过文献，了解清楚。

okhaha[使用道具]
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发表于 2012-7-9 16:47 资料个人空间短消息加为好友

小中大

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