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标题:[求助]我的细胞 一夜全死了，不知道什么原因

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发表于 2012-7-9 16:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]我的细胞 一夜全死了，不知道什么原因


我的细胞一晚上都死了，不知道是什么原因，请您给帮忙看看吧。
一位师姐给了一株练手用的已基本老化的视网膜色素上皮细胞（RPE），我说的基本老化的细胞是指：因为我要做的就是RPE细胞，而且我的细胞来源非常不易，是向别人好不容易要来的细胞，加上这株老化的一共只有三株，那位师姐好心给了我一支已经13代的RPE细胞，让我先练练手，摸摸这种细胞的习性，我在去取这三株细胞之间，已经练过两株不同的细胞了，有肿瘤的，也有正常的，都没什么问题。不知道怎么了，就我要用的细胞全死了。具体流程如下：
　　星期一复苏
　　星期二看细胞贴壁不是很多，大概40%左右，换液换去死掉的细胞。
　　星期三未敢动
　　星期四看细胞贴壁的明显减少，而死亡的细胞越来越多，细胞状态不佳，未看到污染。换液。
　　星期五再换液，目的是想让细胞长的好一些。
　　星期六把瓶里的细胞转到一次性培养皿里（因为听说这种皿有利于细胞贴壁）
　　星期天看细胞已基本贴壁，虽然细胞数量不多，大概只占到瓶底面积的20%。
　　星期一（今早）：看细胞全部飘起来，全部死了，剩下不到10个细胞，培养基清亮，高倍镜下未看到细菌，菌丝，霉菌等污染。

　　备注：1、培养基是新配的，用的是DMEM/F12培养基，PH值为7.26。
　　　　　2、血清用的是杭州四季青的胎牛血清（未灭活），因为实验室的同事们都没灭活。
　　　　　3、CO2箱没有问题，因为同时还有别人的细胞，都没什么不好的表现。

还有，因为我怕是我培养基的问题，我昨天用我的培养基又复苏了一支别的正常细胞，今天去看的时候，发现细胞之间有好多小黑点，高倍镜下看到好像在动，我觉得那是细菌污染，但我们实验室的另外三个位师兄说那不是污染，因为培养基的颜色是清亮的。他们说在复苏24小时以后，如果是细菌污染，培养基早变混了。他们说有的细胞背景看起来就是脏。我也不知道这是不是就是所说的那个黑胶虫呢？你说，怎么样能试出来是不是培养基的问题呢？培养基能使细胞一夜全死了吗？还有什么地方可以试的吗？
因为只剩两支正式实验的细胞了，在没找到这株细胞一夜全死的原因之间，那两株我实在不敢动啊。心里非常的着急，请大家都集思广义帮我想想想。非常感谢啊！
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发表于 2012-7-9 16:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

支原体感染
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xingyi08[使用道具]
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发表于 2012-7-9 16:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

不会是支原体污染吧？

我也遇到了和你差不多的问题，之前细胞长的好好的，可是突然间就全部挂了， 现象和你描述的很像，我也正在困惑呢，哪位高人指点一下啊？谢啦
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utt0989[使用道具]
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发表于 2012-7-9 17:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

这个问题的确很怪,我刚开始练手的时候也是细胞老挂,心里着急,等着做实验呢,还好都找到原因了,所以还是再找找原因吧,要不然复苏了心里还老挂着.
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发表于 2012-7-9 17:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

楼上的那位仁兄，我想问一下你的细胞总挂，后来发现是什么原因造成的阿？说出来交流交流吧。
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lixi559[使用道具]
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发表于 2012-7-9 17:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢各位大侠们的支持帮助楼上 说“我刚开始练手的时候也是细胞老挂,心里着急,等着做实验呢,还好都找到原因了"请问一下，你最后找到原因是什么呢？我看看我是不是也有同样的问题，可以帮助我早点找到解决的办法。先谢谢啦！
　还有，前天复苏的细胞，今天去看的时候状态不是很好，细胞里出现好多的空泡，看起来情况又是不妙，真不知道是怎么了？难道这株细胞也是一天死一批，最后一夜全死掉吗？这倒底是什么原因啊。
　我用的培养基就是GIBICO公司的啊，血清是四季青的，没有灭活的，不知道这有没有影响？谁有高招请帮个忙！
　感激不尽！
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发表于 2012-7-9 17:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

原因说出来怕见笑了，第一次污染了是存放PBS的瓶子裂了一条纹路，而且是靠底部。起先都没注意，第二次用的时候发现擦干了瓶子放在超净台怎么时不时的会有水滴渗出，才发现原来瓶子裂了，汗啊。第二次污染是培养基的问题了，因为我在练手，养的CHL是师姐的，我没有买DMEM（我养HT-29,用1640），培养基是师姐分给我的。操作完4个小时细胞后一看就浑浊了，赶紧找原因，我怕是操作有问题，就用培养基单独培养了，结果发现培养基也有问题了。估计你不是这两个原因，我只是想说别着急，慢慢养吧，急也没用的啊。
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发表于 2012-7-9 17:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我的细胞和楼上的情况差不多，请问你现在找到原因了吗？
我听说可能是买来的血清带有黑胶虫。
希望及时交流，我也没查出什么原因呢
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发表于 2012-7-9 17:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我现在推测的原因可能就是因为血清里的黑胶虫，因为我的细胞可能对其耐受力不强，所以最后死掉了，实验室还有别人也有黑胶虫的污染，可情况还可以，，昨天我们细胞室彻底进行了消毒，希望会对此有所帮助。因为原因没找到，一直不敢复苏细胞。心里着急啊，望大家都互相交流一下。以尽快找到解决的办法。
　还有，我还想到，我细胞死掉的原因，还有可能与培养基有关，因为去拿细胞的时候，人家那边用的一直是DMEM高糖型，而我用的DMEM/F12，不知道这对细胞有没有影响，望高手给指教一下！
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glass[使用道具]
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发表于 2012-7-9 17:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

如果不是细胞污染，可能是不是细胞自身问题？不好意思，对所谓的老化细胞不是很理解
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