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标题:[求助]南京建成LDH试剂盒好吗?

nn255[使用道具]
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[求助]南京建成LDH试剂盒好吗?


请问有人用过建成的LDH试剂盒吗?好吗?
听说送医院检验科测细胞培养液的LDH也可以,但是对培养基的量(多少毫升),培养基是1640?DMEM? 细胞种在什么板子上,细胞数量是多少?还有什么要求?要破碎细胞吗?还是直接取上清?
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misswu61[使用道具]
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不用破碎细胞,去培养细胞的上清就行了。我用的培养基是DMEM
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gmjghh[使用道具]
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我用的是罗氏诊断的LDH试剂盒,有比较详细的说明:
1.培养基1640和DMEM都可以,但是要求血清浓度在1%以下,因为动物血清含有LDH,可能会对实验结果产生影响,而且按照说明书的要求,每块96孔板还要做培养液的空白对照;
2.关于细胞的数量,应根据不同的细胞系的生长特点决定,说明书的要求是正式实验开始前进行最优化接种细胞数量的预实验,就是看多大密度的细胞在培养结束时的自发性LDH释放比较少(即自发死亡较少),因为过多的细胞自发死亡也会影响实验结果;
3.取细胞上清做LDH测定时,要注意离心速度不要太快造成细胞死亡,人为增加LDH的浓度,推荐的离心速度是250×g。
4.按照实验原理,是需要完全破碎细胞做为最高浓度的LDH对照的,试剂盒里提供了细胞裂解液,供培养结束时裂解细胞用。这从实验结果的计算公式也可以看出来:
毒性(%)=(实验组LDH水平-细胞自发释放的LDH水平)/(最高浓度LDH水平-细胞自发释放的LDH水平)

有哪位战友需要说明书的可以跟贴,我扫描后做成附件上传,方便大家查阅!
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