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标题:[求助]树突状细胞培养加细胞因子的浓度

小螺号[使用道具]
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发表于 2012-7-10 15:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]树突状细胞培养加细胞因子的浓度



本人是新手，拟做树突状细胞的培养。从人外周血分离PBMC，然后用GM-CSF和IL-4诱导出DC，但我看了一些文献，所使用的GM-CSF和IL-4浓度相差很大，有人用的GM-CSF：100ng/ml，IL-4：500u/ml，还有人用的GM-CSF：20ng/ml，IL-4：2ng/ml等等。为什么浓度差别会这么大啊，到底什么浓度是最好的？是不是还和细胞因子的产家有关系啊？（我用的是peprotech的细胞因子）
另外还请教一个问题：u/ml和ng/ml怎么换算的啊？
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发表于 2012-7-10 15:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我们实验室是这样做的，
按照说明书来的，例如 GM-CSF，a specific activity of > 1 x 107 units/mg.，我们就认为1mg，就是1 x 107 units，故10unit/ng，
不同实验室，条件不一样，培养基不同，细胞来源不一样，故用的浓度不一样，最好是自己摸一摸。
希望对你有帮助。
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发表于 2012-7-10 15:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我们用的是20ng/ml
建议用R&D的细胞因子，不错
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发表于 2012-7-10 15:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我们的DC用PR1640和10%FCS调整细胞浓度至10E6/ml,最后加GM-CSF和IL-4,GM-CSF(ul)=培养基的体积(ml)x 2,IL-4=培养基的体积(ml)x 6,这是我们自己摸出来的,原始浓度是1000u/ml.我们养出来的细胞还可以.
希望对你有所帮助.
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发表于 2012-7-10 15:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
再问一个问题：1000u/ml换算成ng/ml是多少啊，我买的细胞因子是20ug一支的，不知道有多少u？谢谢！
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发表于 2012-7-10 15:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢楼上，u/ml和ng/ml的换算我知道了，那20ug细胞因子就有2×10 5 u了。
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发表于 2012-7-10 15:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
GM-CSF和IL-4 浓度都是20ng/ml吗？R&D的细胞因子是哪个国家产的？
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发表于 2012-7-10 15:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

DC培养时，GM的质量和浓度很重要，而与IL-4的关系不大。GM的浓度与活性有关，活性差的GM加1mg/ml，也没用。如果你是新手，我建议用R&D的，质量是有保证的（我本人试过多个公司的），10ng/ml绝对能养好，但好货不便宜，25ug包装的要7400RMB。
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发表于 2012-7-10 15:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

这么贵啊，那我们这里可能买不起哦，我买的peprotech的10ug只要600RMB，我是听别人说可以，自己还没有试过。这么难养，听你这么说我都没有信心了。
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发表于 2012-7-10 15:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我用20ng/ml的GM＋10ng/ml的IL4培养的DC，但最近发现大部分都变成巨噬细胞，请问是什么原因呢，是不是细胞因子出了问题？？谢谢
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