[求助]SA-β-Gal染色法检测细胞衰老

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标题:[求助]SA-β-Gal染色法检测细胞衰老

c86v[使用道具]
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发表于 2012-7-10 15:26 资料个人空间短消息加为好友

小中大

请问：
打算用SA-β-Gal染色法检测细胞衰老，请问各位高手染色的试剂你们是自己配制的还是购买试剂盒的？哪家公司的试剂盒好？国产的质量如何？
另外，细胞衰老指标中telomerase activity检测及hTERT mRNA的RT-PCR哪个指标较好？

ero11[使用道具]
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发表于 2012-7-10 15:27 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我是自己配的。我用ph计滴定ph6.0的柠檬酸缓冲液，用DMF溶解X-Gal, 最后效果还不错。
hTERT mRNA的RT-PCR好像非常贵，所以没做。
telomerase activity检测不知道贵不贵？

is2011[使用道具]
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发表于 2012-7-10 15:29 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我们实验室用的是试剂盒，上海杰美生产的，用起来感觉还可以。当时买的是700元左右，后来据说降价了，根据每次的用量，可以检测100－200次。

viviwang1987[使用道具]
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发表于 2012-7-10 15:29 资料个人空间短消息加为好友

小中大

你的柠檬酸缓冲液是如何配置的,用什么滴定PH?
另外NEWFISH914,用试剂盒后你做过复染吗?很多文献上到要复染,这样会不会影响试剂盒染色效果?

eric930[使用道具]
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发表于 2012-7-10 16:05 资料个人空间短消息加为好友

小中大

柠檬酸缓冲液我忘了具体剂量了，好像是0.8g柠檬酸和4.8g柠檬酸三钠配200ml差不多6.0左右吧，你可以在网上查查（多些少些应该也无所谓，反正后面还要滴定），然后用NaOH溶液或HCl滴定。
复染可以用Hoechst33258，荧光显微镜观察可以准确的计数细胞总数，只要5分钟就可以了，不影响X－Gal的染色和观察。

skytree[使用道具]
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发表于 2012-7-10 16:06 资料个人空间短消息加为好友

小中大

请问用用DMF溶解X-Gal时，DMF需要消毒吗？整个过程需要无菌操作吗？

eric930[使用道具]
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发表于 2012-7-10 16:06 资料个人空间短消息加为好友

小中大

不需要。因为染色的细胞已经固定了，也不需要再养了

milkdog[使用道具]
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