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标题:[求助]脐静脉内皮细胞培养

fox_79[使用道具]
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发表于 2012-7-10 17:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]脐静脉内皮细胞培养



今天历尽艰辛找来一条脐带,开始用组织块培养法培养脐静脉内皮细胞.
但是遇到一个最大的问题,可能也比较让人吐血的问题,就是我实在是分辨不出来哪条是脐静脉.
胎儿拿出来的时候静脉差不多就塌陷了,我没有栓直接放在1640里拿回实验室.虽然牢记了两条动脉螺旋缠绕静脉,可只觉得黏黏的,看得见很明显的两条动脉,可就是分辨不出来哪里才是静脉.只好把中间一条似乎是条索状的东西剪碎放在培养瓶里,希望可以长点东西出来安慰下我.
老师们有没有什么诀窍可以很简单的找到脐静脉呢?
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zranqi_1[使用道具]
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发表于 2012-7-10 17:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我要分离培养的是脐动脉平滑肌细胞，也遇到过同样的困难。动脉管壁较厚，管腔较小，还是比较容易分离的，静脉管壁较薄，管腔较大，在脐带中央位置的。建议把脐带断面切平整些后再辨认脐静脉，也许会容易些。我用组织贴块法做这个实验好几次了，可是平滑肌长出的很少，原因分析不太清，希望你实验早日成功，可以交流交流经验呵呵！
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fox_79[使用道具]
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发表于 2012-7-10 17:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

是啊,超级滑,因为是第一次做准备也不是很充分.希望下次能顺利些.
还有一个问题,因为我实验需要的是比较纯的内皮细胞,组织块贴壁肯定会混杂很多其他的细胞,比如平滑肌细胞,成纤维细胞等,怎么才能得到比较纯的内皮细胞呢??
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zranqi_1[使用道具]
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发表于 2012-7-10 17:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你有内皮细胞原代培养的相关资料文献的吧？个人认为内皮细胞原代培养会不会用酶法比较好一点呢？在找平滑肌相关资料时，见过类似的关于内皮的文献，好像用的都是酶法呢！不过对酶法我也是初次实验，还在找资料呢！可以再在园子里找找！呵呵……
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loli[使用道具]
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发表于 2012-7-10 17:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

脐静脉内皮细胞的分离培养,用酶消化法可能效果更好些.Jaffe式灌流法可以较好地消化分离到内皮细胞.
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fox_79[使用道具]
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发表于 2012-7-10 17:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
其实我也是觉得应该用酶要好些,自己找的资料都是酶法.但是实验室的老师说用组织块就可以了,所以现在预实验就用的组织块.我一个小屁孩也不敢嚣张.
酶法就更需要准确地找到脐静脉了.对吧.
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发表于 2012-7-10 17:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我也打算做脐静脉内皮细胞的原代培养，不过我计划使用胶原酶消化，由于贴壁的时间不同，成纤维细胞和平滑肌细胞可以通过控制消化时间和换液的方法将其去除，希望以后我们多多的交流经验。
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fei1226com[使用道具]
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发表于 2012-7-10 17:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我以前在做脐静脉内皮细胞原代培养时,采用的是I型胶原酶 37度 消化5-10分钟即可.但是应该再使用新配制的胶原酶之前 要摸索一下最佳的消化时间为好.另外消化的时间跟脐带本身的性质有关.尽量在消化时,避免酶液外漏,使杂细胞增多,为今后内皮细胞的纯化增加麻烦.
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发表于 2012-7-10 17:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我一直在养脐带的内皮细胞,用胶原酶消化12分钟左右吧.但是不知道为什么老会污染.请问你们放在多大的皿里养的?细胞多吗?
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fox_79[使用道具]
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发表于 2012-7-10 17:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

再请教一个问题，老师们一般是用什么培养基养内皮细胞呢？
含谷胺酰氨的1640不加生长因子可以不呢？还是必须用M199？
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