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标题:[求助]细胞污染,高手来诊断

toy[使用道具]
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[求助]细胞污染,高手来诊断



近日实验室所养的内皮,干细胞,HEK细胞出现如下情况:生长缓慢,高倍镜下可见少量有自主运动的黑点,圆型或长杆样,细胞外液不浑浊,采用膜片钳电极吹破细胞膜可见大量小虫破膜而出,快速运动,迅速向四周扩散。请教是何感染,有何对策?
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以前我们实验室也曾碰到过这种情况,用的是Gibco serum, 小黑点具体不祥。后来用Hyclone 血清,就好了。
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04906[使用道具]
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我们也遇到类似情况,基本上都是由血清引起的,换其他牌子的血清,或者换不同批号的血清试试看。我们怀疑是被洋葱佰克霍尔德菌(Burkholderiacepacia)污染了,它属于假单胞菌属。
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utt0989[使用道具]
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请问一楼用的是什么血清?
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toy[使用道具]
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开始用的是Hyclone的,整个实验室细胞扔光,紫外线,器械泡酸,换Gibico的血清,天哪,养了5天后,原代细胞外少量原地打转的小黑点,用膜片钳玻璃电极吹破细胞,还是老样子,很多快速运动的小黑点。郁闷!
有何建议吗?
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是细菌污染吧,用抗生素洗洗看看呢,我的细胞正在洗呢,郁闷!也是细胞外的小黑点,加十倍的抗生素才少点,但是我不敢停抗生素啊!没有保种了!
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loli[使用道具]
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我也是用GIBCO的新生牛血清,好象没有发现这种现象啊.楼主可以把其他没用过的分装的血清取一点做无菌实验看看,不一定是血清的原因哦,仅供参考
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fei1226com[使用道具]
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开始用的是Hyclone的,整个实验室细胞扔光,紫外线,器械泡酸,换Gibico的血清,天哪,养了5天后,原代细胞外少量原地打转的小黑点,用膜片钳玻璃电极吹破细胞,还是老样子,很多快速运动的小黑点。郁闷!
有何建议吗?

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实验室全部清扫了还不行,有没有考虑过失培养液、PBS的问题可以对培养液、血清等作一下污染检测。把血清和滤过的培养基做一下无菌实验,各取0.5毫升,加到24孔板里,放到细胞培养箱里过夜,镜下观察一下。
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fei1226com[使用道具]
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我们实验室,也出现过这种情况,但是对培养相稍微消毒后就不见了,尽管还有小黑点,但是都是不会动的,怀疑是细胞破碎后的组织块了,因为用植快法培养细胞时比用消化法培养出现的小黑点少。可能是消化法对细胞损伤更大的原因。

看看别人的描述:
你所看到的“小黑点”,可能原因主要有以下几个方面:
1、可能与血清灭活有关,血清通常在56度30分钟灭活后会产生大量类似这种“小黑点”的东西,可用未灭活的血清进行试验以证明;
2、可能是细胞崩解的碎片,当细胞大量崩解后,细胞内的内容物会释放出来,如线粒体等,这个可以通过换液逐渐消除;
3、可能是支原体污染,如果在视野下你能看到这些“小黑点”在运动,那么支原体污染的可能性较大,这个可以加抗生素解决;
希望多少对你有所帮助
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cj_mondy[使用道具]
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我们也碰到过这种情况,应该是血清的问题。血清有时因为批次不同而质量各异。所以我们一般先试用后再买,另外做时分开a和b液对比一下,这样就可以鉴别是不是需阿青的问题,还是操作的问题。不过一般加抗生素意义好像不打
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