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标题:[求助]改方法,要分别留取血清和PBMC作培养

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发表于 2012-7-12 13:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]改方法,要分别留取血清和PBMC作培养



修改了下课题,以前不用留血清,只要PBMC,现在血清也要留下来做培养用.

按以前摸索的步骤,离心后分四层的时候再取血清是不是不行啊,

我实验里加的全血.没有稀释的,但是加过了分离液后,离心后取血清会不会对细胞的生长有影响?

还有个问题,血清做培养细胞(PBMC或着肾小管上皮细胞) 用的时候, 培养时间不长,72小时,需不需要另加培养液?

淋巴细胞分离技术,坛子上很多战友曾经热心指导过我.再次谢谢.
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发表于 2012-7-12 13:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

1、加抗凝剂，先离心全血，取血清后加等体积PBS稀释细胞，再加分离液分离
2、不加培养液没试过，个人认为应该加，以保持PH稳定
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 小中大
离心全血的速度和时间呢?我以前分离时用的是2000转,20min,洗涤时用的是1500转,5min
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发表于 2012-7-12 13:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
,那么我用1500转,10min后离心全血后,取血清后加PBS,分离液再离心,速度还是2000转,20min么,洗涤还是1500转,5min么?
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 小中大

和分离全血中PBMC一样，2000转,20min，洗涤1500转,5min
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发表于 2012-7-12 13:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
血浆和血清是有区别的。按你所说的，你要留的是血浆，而不是血清。血浆是抗凝血沉降后的上清，血清是不抗凝血沉降后的上清，成分有所不同。
留取不稀释的血浆，可以将抗凝血抽取后，稍微竖立放置1小时左右，然后离心，可获得血浆。要继续分离PBMC的话，取血浆的过程需要在超净台里无菌进行。然后PBMC的分离按照楼上的战友那样，稀释了血细胞后按照常规分离步骤进行。
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发表于 2012-7-12 13:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
抗凝血抽取后,我不放置一个小时,直接离心可以么.时间长的话,淋巴细胞的活性可能会受影响吧?
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 小中大
血液由液体成分血浆和有形成分血细胞两部分组成，而血清是血凝后析出的淡黄色澄清液体，较之血浆少了某些凝血因子和纤维蛋白原。

谢谢楼上提醒区别~~我原先设计的确实是血清培养细胞,参考过的文献也是血清.而现在变成血浆的话,不知道对细胞生长会不会有影响,我要观察的结果是测几个细胞因子和细胞的免疫组化

还有个问题,血浆,血清用来培养细胞,是不是都要灭活补体呢?
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发表于 2012-7-12 13:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
1、加抗凝剂，先离心全血，取血清后加等体积PBS稀释细胞，再加分离液分离
2、不加培养液没试过，个人认为应该加，以保持PH稳定

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那么说你以前做过血清或者血浆培养细胞的,而且加了培养液?不知道这两者用什么比例合适,我预计整个培养体系2ml.5ml血按你说的方法,能取出多少血浆呢?
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发表于 2012-7-12 13:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

可以用自体血浆培养细胞的。自体血浆也需要56度灭活30分钟再用。
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